Fc領域ヘテロ会合化を必要としない非対称二重特異性抗体の作製技術開発

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本年度は独自に設計した二重特異性抗体フォーマットの汎用性に関する検討を中心に研究を進めた。以前の研究において、がん関連抗原HER2/HER3を標的とするIgG型非対称二重特異性抗体を作製し、二重特異性やがん細胞の増殖阻害効果を有することを明らかにした。そこで異なる抗体可変領域を用いて、同様に二重特異性抗体の作製を試みた。具体的にはB細胞表面抗原BCMA/T細胞表面抗原CD3およびB細胞表面抗原CD20/CD3を標的とする二重特異性抗体をそれぞれ作製した。まずグリシン/セリン残基から成るペプチドリンカーを介して、2種類の重鎖可変領域-1番目重鎖定常領域を連結し、A鎖発現ベクターを作製した。次に共通軽鎖可変領域-軽鎖定常領域をFc領域に連結し、B鎖発現ベクターを作製した。動物細胞を用いて、A鎖およびB鎖を共発現させ、培養上清からプロテインAカラムおよび陽イオン交換カラムにより精製したところ、目的の二重特異性抗体を得ることができた。示差走査蛍光法により分析した結果、作製した二重特異性抗体は親抗体と同等の熱安定性を有することがわかった。フローサイトメトリーおよび表面プラズモン共鳴法により分析したところ、作製した2種類の二重特異性抗体はいずれも抗原結合活性を示した。さらに、活性化T細胞に対して、BCMA/CD3二重特異性抗体、蛍光標識したBCMA細胞外ドメインを順に反応させ、フローサイトメトリーにより分析した結果、ピークシフトが見られたことから作製した組換え抗体は二重特異性を有することがわかった。また、CD20/CD3二重特異性抗体について、エフェクター細胞として活性化T細胞を用いて、CD20陽性細胞に対する傷害性を調べたところ、傷害性が見られたことから二重特異性を有すると考えた。