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Fc領域ヘテロ会合化を必要としない非対称二重特異性抗体の作製技術開発

开发不需要Fc区异源结合的不对称双特异性抗体的生产技术

基本信息

批准号：
22K04846
负责人：
中西猛
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本年度は独自に設計した二重特異性抗体フォーマットの汎用性に関する検討を中心に研究を進めた。以前の研究において、がん関連抗原HER2/HER3を標的とするIgG型非対称二重特異性抗体を作製し、二重特異性やがん細胞の増殖阻害効果を有することを明らかにした。そこで異なる抗体可変領域を用いて、同様に二重特異性抗体の作製を試みた。具体的にはB細胞表面抗原BCMA/T細胞表面抗原CD3およびB細胞表面抗原CD20/CD3を標的とする二重特異性抗体をそれぞれ作製した。まずグリシン/セリン残基から成るペプチドリンカーを介して、2種類の重鎖可変領域-1番目重鎖定常領域を連結し、A鎖発現ベクターを作製した。次に共通軽鎖可変領域-軽鎖定常領域をFc領域に連結し、B鎖発現ベクターを作製した。動物細胞を用いて、A鎖およびB鎖を共発現させ、培養上清からプロテインAカラムおよび陽イオン交換カラムにより精製したところ、目的の二重特異性抗体を得ることができた。示差走査蛍光法により分析した結果、作製した二重特異性抗体は親抗体と同等の熱安定性を有することがわかった。フローサイトメトリーおよび表面プラズモン共鳴法により分析したところ、作製した2種類の二重特異性抗体はいずれも抗原結合活性を示した。さらに、活性化T細胞に対して、BCMA/CD3二重特異性抗体、蛍光標識したBCMA細胞外ドメインを順に反応させ、フローサイトメトリーにより分析した結果、ピークシフトが見られたことから作製した組換え抗体は二重特異性を有することがわかった。また、CD20/CD3二重特異性抗体について、エフェクター細胞として活性化T細胞を用いて、CD20陽性細胞に対する傷害性を調べたところ、傷害性が見られたことから二重特異性を有すると考えた。

This year, the Center for Research on the Design of Dual-Specific Antibodies (DSABs) Previous studies have shown that IgG-type asymmetric double specific antibodies targeting HER2/HER3 are effective in inhibiting cell proliferation. The antibody can be used in different fields, and the double specific antibody can be used in different fields. Specific double specific antibodies targeting B cell surface antigen BCMA/T cell surface antigen CD3 and B cell surface antigen CD20/CD3 were developed. 2 types of relocatable domains-1 relocatable domains-2 types of relocatable domains-3 types of relocatable domains-4 types of relocatable domains-5 types of relocatable domains-6 types of relocatable domains-6 types of relocatable domains-7 types of relocatable domains-8 types of relocatable domains-9 types of re Second, common lock field-lock field-Fc field-link, B lock field-control Animal cells are used for the co-development of A and B locks, the culture supernatant is used for the co-development of A and B locks, and the culture supernatant is used for the co-development of A and B locks, and the culture supernatant is used for the co-development of A and B locks. The results of the analysis, the preparation and the thermal stability of the double specific antibody and the parent antibody were shown. 2 kinds of double specific antibodies were detected by resonance analysis. In addition, activated T cells were identified by BCMA/CD3 double specificity antibodies, and the results of the analysis were as follows: CD20/CD3 double specificity antibodies are used to modulate the virulence of CD20 positive cells and activated T cells.