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イソニトリル代謝酵素群の分子機能解析

异腈代谢酶的分子功能分析

基本信息

批准号：
22380185
负责人：
橋本義輝
金额：
$ 7.82万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22380185/
关键词：
イソニトリル N-署換ホルムアミドアミン代謝酵素

项目摘要

イソニトリル代謝群の中で、(他の酵素に関しては継続して研究を進めているが)現在、特にArthrobacter pascens F164株のイソニトリルヒドラターゼに関して得られている成果について以下に記載する。N-置換ホルムアミドをアミンとギ酸に分解する新規酵素N-置換ホルムアミドデポルミラーゼを有するF164株からイソニトリルヒドラターゼを精製し、物理化学的・酵素科学的諸性質を検討するとともに、これまで唯一の報告例であるPseudomonas putida N19-2株のイソニトリルヒドラターゼと比較した。精製したF164株イソニトリルヒドラターゼは、SDS-PAGE上でのサブユニット分子量がN19-2株イソニトリルヒドラターゼとは異なり、約13kDa大きい値を示した。F164株イソニトリルヒドラターゼは活性や基質特異性などにおいて、N19-2株イソニトリルヒドラターゼと異なることを確認した。さらに、F164株イソニトリルヒドラターゼのCDスペクトルを測定した結果、N19-2株イソニトリルヒドラターゼとは異なるスペクトルを示した。そこで両株由来の抗イソニトリルヒドラターゼポリクローナル抗体をそれぞれ作成し、Western解析により、同じイソニトリルヒドラターゼ由来の抗体とは交差性を示すが、異なるイソニトリルヒドラターゼ由来の抗体との交差性が全くなく、両酵素の構造が異なることが示唆された。本酵素遺伝子のクローニングの結果、本酵素遺伝子はアミノ酸レベルで全く相同性を示さなかった。これらの結果より、F164株N19-2株イソニトリルヒドラターゼとはN19-2株イソニトリルヒドラターゼとは同じ反応を触媒するものの、全く異なる構造を有した新規な酵素と同定した。

In particular, Arthrobacter pascens F164 strain has been isolated from the middle of the metabolic group of the protein, and the results of the study on other enzymes are described below. N-Substitute N-Substitute The purified F164 strain has a molecular weight of N19-2 and a molecular weight of about 13kDa. The F164 strain has been identified as active and matrix-specific, while the N19-2 strain has been identified as active and matrix-specific. In addition, F164 strain has been tested for CD selection and N19-2 strain has been tested for CD selection and N19-2 strain has been tested for CD selection. The origin of the anti-virus and anti-virus antibodies is determined by Western analysis, and the origin of the anti-virus and anti-virus antibodies is determined by Western analysis. The origin of the anti-virus and anti-virus antibodies is determined by the structure of the anti-virus and anti-virus enzymes. The enzyme gene was identified as a complete sequence of sequences. As a result, F164 strain N19 - 2 has a new enzyme identity.