イソニトリル代謝酵素群の分子機能解析

异腈代谢酶的分子功能分析

基本信息

批准号：
22380185
负责人：
橋本義輝
金额：
$ 7.82万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22380185/
关键词：
イソニトリル N-署換ホルムアミドアミン代謝酵素

项目摘要

イソニトリル代謝群の中で、(他の酵素に関しては継続して研究を進めているが)現在、特にArthrobacter pascens F164株のイソニトリルヒドラターゼに関して得られている成果について以下に記載する。N-置換ホルムアミドをアミンとギ酸に分解する新規酵素N-置換ホルムアミドデポルミラーゼを有するF164株からイソニトリルヒドラターゼを精製し、物理化学的・酵素科学的諸性質を検討するとともに、これまで唯一の報告例であるPseudomonas putida N19-2株のイソニトリルヒドラターゼと比較した。精製したF164株イソニトリルヒドラターゼは、SDS-PAGE上でのサブユニット分子量がN19-2株イソニトリルヒドラターゼとは異なり、約13kDa大きい値を示した。F164株イソニトリルヒドラターゼは活性や基質特異性などにおいて、N19-2株イソニトリルヒドラターゼと異なることを確認した。さらに、F164株イソニトリルヒドラターゼのCDスペクトルを測定した結果、N19-2株イソニトリルヒドラターゼとは異なるスペクトルを示した。そこで両株由来の抗イソニトリルヒドラターゼポリクローナル抗体をそれぞれ作成し、Western解析により、同じイソニトリルヒドラターゼ由来の抗体とは交差性を示すが、異なるイソニトリルヒドラターゼ由来の抗体との交差性が全くなく、両酵素の構造が異なることが示唆された。本酵素遺伝子のクローニングの結果、本酵素遺伝子はアミノ酸レベルで全く相同性を示さなかった。これらの結果より、F164株N19-2株イソニトリルヒドラターゼとはN19-2株イソニトリルヒドラターゼとは同じ反応を触媒するものの、全く異なる構造を有した新規な酵素と同定した。

在下面，在pascens Pascens菌株F164中，尤其是关于异硝基水合物群的当前在异构体代谢组中获得的结果（尽管我们正在继续研究其他酶）。从F164菌株中纯化了异戊酸水合物，其中包含新型酶N-取代的甲酰胺去氨基酰胺酶，将N-取代的甲酰胺分解为胺和甲酸，并检查了与PseudomoneS的唯一示例，并进行了比较，并比较了PSIDAN-N-N-N-N19--2，进行了物理化学和酶的特性。与N19-2菌株异硝基水合物酶不同，纯化的F164菌株异构水合物的较高值约为13 kDa。已经证实，在活性和底物特异性方面，F164菌株异硝基水合物酶与N19-2菌株异构水合酶有所不同。此外，F164菌株的CD光谱显示出与N19-2菌株异硝基水合物的光谱不同。因此，制备了来自两种菌株的抗二酸水溶酶多克隆抗体，西方分析表明，尽管它们与源自同一构硝基水合物酶得出的抗体横截面，但它们并非与源自不同的异构体水合物的抗体横截面，而两种enzemes的结构都是不同的。该酶基因的克隆表明该酶基因在氨基酸水平上没有同源性。这些结果表明，F164菌株N19-2菌株异硝基水合物是一种具有完全不同结构的新型酶，尽管它催化与N19-2菌株异硝基水合物水合物相同的反应。