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イソニトリル代謝酵素群の分子機能解析

异腈代谢酶的分子功能分析

基本信息

批准号：
22380185
负责人：
橋本義輝
金额：
$ 7.82万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22380185/
关键词：
イソニトリル N-署換ホルムアミドアミン代謝酵素

项目摘要

イソニトリル代謝群の中で、(他の酵素に関しては継続して研究を進めているが)現在、特にArthrobacter pascens F164株のイソニトリルヒドラターゼに関して得られている成果について以下に記載する。N-置換ホルムアミドをアミンとギ酸に分解する新規酵素N-置換ホルムアミドデポルミラーゼを有するF164株からイソニトリルヒドラターゼを精製し、物理化学的・酵素科学的諸性質を検討するとともに、これまで唯一の報告例であるPseudomonas putida N19-2株のイソニトリルヒドラターゼと比較した。精製したF164株イソニトリルヒドラターゼは、SDS-PAGE上でのサブユニット分子量がN19-2株イソニトリルヒドラターゼとは異なり、約13kDa大きい値を示した。F164株イソニトリルヒドラターゼは活性や基質特異性などにおいて、N19-2株イソニトリルヒドラターゼと異なることを確認した。さらに、F164株イソニトリルヒドラターゼのCDスペクトルを測定した結果、N19-2株イソニトリルヒドラターゼとは異なるスペクトルを示した。そこで両株由来の抗イソニトリルヒドラターゼポリクローナル抗体をそれぞれ作成し、Western解析により、同じイソニトリルヒドラターゼ由来の抗体とは交差性を示すが、異なるイソニトリルヒドラターゼ由来の抗体との交差性が全くなく、両酵素の構造が異なることが示唆された。本酵素遺伝子のクローニングの結果、本酵素遺伝子はアミノ酸レベルで全く相同性を示さなかった。これらの結果より、F164株N19-2株イソニトリルヒドラターゼとはN19-2株イソニトリルヒドラターゼとは同じ反応を触媒するものの、全く異なる構造を有した新規な酵素と同定した。

Arthrobacter pascens The results of F164 strain's new strain are recorded below. N-replacement ホルムアミドをアミンとギ acid decomposition するnew regulation enzyme N-set Change to the ホルムアミドデポルミラーゼを有するF164 strain からイソニトリPseudomonas putida N19-2 strains of the same strain. Refined したF164 strain イソニトリルヒドラターゼは, でのサブユニット points on SDS-PAGE The subunit N19-2 strain is a イソニトリルヒドラターゼとはisoなり, with a large size of about 13kDa. F164 strain イソニトリルヒドラターゼは active や matrix specific などにおいて, N19-2 strains of イソニトリルヒドラターゼとdifferent なることをconfirmed した.さらに、F164 strain イソニトリルヒドラターゼのCDスペクトルをdetermination knot Fruit, N19-2 strain of イソニトリルヒドラターゼとはiso-なるスペクトルをshowした. Anti-イソニトリルヒドラターゼポリクローナルantibody をそじイソニトリルヒドラターThe origin of ゼのantibodies and cross-fertilization すが、isoなるイソニトリルヒドラターゼThe cross-functionality of the antibody and the structure of the enzyme are different. The result of this enzyme is the same as the original enzyme. The result of this enzyme is the same as the original enzyme.これらの成より、F164 strain N19-2 strain イソニトリルヒドラターゼとはN19-2 strain イソニトThe リルヒドラターゼとは Same as the reaction 濜をcatalyst するものの, the whole くdifferent なるstructure を有した新码なEnzyme and the same determination した.