放線菌の新規遺伝子プロモーターの機能開発

放线菌新型基因启动子的功能发育

• 批准号: 13760233
• 负责人: 橋本 義輝
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760233/
• 关键词: プロモーター; 遺伝子; 発現

Rhodococcu rhodocurous J1菌由来のタンパク質誘導発現系(ニトリルヒドラターゼ系)が既に取得されているが、本系を利用した場合、尿素を誘導剤とした場合に50%以上を占めるほどニトリルヒドラターゼ(ニトリルをアミドに分解する酵素)が著量発現する。一般的に利用されている大腸菌での発現系ではRhodococcus属由来の遺伝子はしばしば発現しないことが認められていることから、Rhodococcus属由来の酵素による有用物質生産などを考えた場合、Rhodococcus属を宿主とする大量発現系が必要となる。Rhodococcus属放線菌内で複製するプラスミドにニトリルヒドラターゼ遺伝子周辺領域を連結・導入し、J1菌とは別のRhodococcus属放線菌において発現するかを確認した。その結果、(構成的ではあるが)ニトリルヒドラターゼの高発現が確認できたことから高発現ベクターを構築できる可能性が示唆された。次に、産業上有用な特徴を有するロドコッカス属放線菌の宿主としての利用を目指し、遺伝子組換え系(宿主・ベクター系)の開発を試みた。当研究室保有のロドコッカス属放線菌、および理化学研究所微生物系統保存施設(JCM)と独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源センター(NBRC、旧IFO)から購入した計40株以上のロドコッカス属放線菌を対象として、プラスミドを検索したところ、数種のプラスミド保有株がスクリーニングできた。

Rhodococcus rhodocus J1 is derived from a variety of enzymes that are present in more than 50% of the total amount of the enzyme that is used in the production, utilization, and urea-inducing agents. In general, the development system of Escherichia coli is necessary for the production of useful substances by enzymes derived from Rhodococcus. Rhodococcus spp. is a genus of bacteria that replicates within the genus Rhodococcus, and the presence of J1 bacteria in the genus Rhodococcus is confirmed. The result of the test is that the probability of the test is higher than that of the test. Second, the industry has useful characteristics, such as the use of host cells, the development of host cell systems, and the development of host cell systems. When the research laboratory holds more than 40 strains of radioactive bacteria, the Institute of Microsystems Preservation (JCM) and the independent administrative corporation Product Evaluation Technology Base Organization Biological Heritage Resource Center (NBRC, old IFO), the company has purchased more than 40 strains of radioactive bacteria.

项目成果

Goda, M. et al.: "Discovery of a novel enzyme, isonitrile hydratase, involved in nitrogen-carbon triple bond cleavage"J.Biol.Chem.. 276. 23480-23485 (2001)

Goda, M. 等人：“发现一种参与氮-碳三键裂解的新型酶，异腈水合酶”J.Biol.Chem.. 276. 23480-23485 (2001)

Hashimoto, Y. et al.: "Extracellular synthesis, specific recognition and intracellular degradation of cyclomaltodextrins by hyperthermophilic archaeon, Thermococcus sp.Blool"J. Bacteriol.. 183. 5050-5057 (2001)

Hashimoto, Y. 等人：“超嗜热古菌 Thermococcus sp.Blool 对环麦芽糖糊精的胞外合成、特异性识别和胞内降解”J.

Hashimoto, Y.et al.: "Site-directed mutasenesis for cystein residnes of Cobalt-containing nitrile hydratase"J.Inorg.Biochem.. (印刷中). (2002)

Hashimoto, Y. 等人：“含钴腈水合酶半胱氨酸残基的定点变位”J.Inorg.Biochem.（印刷中）。

Hashimoto, Y. et al.: "Site-directed mutagenesis for cysteine residues of cobalt-containing nitrile hydratase"J.Inorg.Biochem. 91. 70-77 (2002)

Hashimoto，Y.等人：“含钴腈水合酶的半胱氨酸残基的定点诱变”J.Inorg.Biochem。

Goda, M.et al.: "Isonitrile hydratase from Pseudomonas putida N19-2"J.Biol.Chem.. 277. 45860-45865 (2002)

Goda，M.等人：“来自恶臭假单胞菌 N19-2 的异腈水合酶”J.Biol.Chem.. 277. 45860-45865 (2002)