Precise hybrid synthesis of glycoprotein through amino acid sequence-specific introduction of oligosaccharide followed by enzymatic transglycosylation reaction

通过氨基酸序列特异性引入寡糖，然后进行酶促糖基转移反应，精确杂合合成糖蛋白

• 批准号: 22550105
• 负责人: KOBAYASHI Atsushi
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22550105/
• 关键词: 糖タンパク質合成; 酵素化学合成; アマドリ転移反応; 配列特異的反応; 高分子反応; アマドリ転位反応; 酵素的配糖化; 糖オキサゾリン; 活性化糖; 複合糖質; 糖タンパク質; 化学-酵素法; リゾチーム; 基質エンジニアリング; 加水分解酵素; 酵素的糖転移反応; 受容体特異性; N-結合型糖鎖; 無保護糖活性化; 糖蛋白質; 一段階糖誘導体合成; 糖蛋白質糖鎖

It is difficult to obtain homogeneous glycoproteins, although it is increasing our knowledge concerning physiological functions of glycoproteins. Nowadays, it is very easy to obtain bare proteins that fold appropriately by using prokaryote cells like Escherichia coli, and it is possible to obtain desired glycoproteins by conjugating with oligosaccharide and proteins precisely. Recently, it was reported that the Amadori rearrangement occurred between oligosaccharides and proteins in a sequence specific manner. Based on this report, I have investigated the effect of additives on the Amadori rearrangement reaction and acceleration of its reaction rate. The most striking result was that the effects of borate ion were depended upon chemical structure of sugars. For example, very large reaction rate using D-fructose was observed in phosphate buffer, although almost no reaction was observed in borate buffer. Investigation of sequence specificity of the Amadori rearrangement is under way.

虽然它增加了我们对糖蛋白生理功能的认识，但很难获得均匀的糖蛋白。目前，利用大肠杆菌等原核细胞可以很容易地获得适当折叠的裸蛋白，并且可以通过与低聚糖和蛋白质的精确偶联来获得所需的糖蛋白。最近有报道称，低聚糖和蛋白质之间的Amadori重排以序列特异性的方式发生。基于这篇报告，我研究了添加剂对Amadori重排反应的影响以及对其反应速率的加速。最引人注目的结果是，硼酸盐离子的作用取决于糖的化学结构。例如，使用d -果糖在磷酸盐缓冲液中观察到非常大的反应速率，尽管在硼酸盐缓冲液中几乎没有观察到反应。Amadori重排的序列特异性研究正在进行中。

项目成果

糖オキサゾリンを糖供与体とするLacto-N-tetraoseの酵素合成

以糖恶唑啉为糖供体酶法合成乳-N-四糖

• 发表时间: 2013
• 作者: Naoki Yoshida;Masato Noguchi;Tomonari Tanaka;Takeshi Matsumoto;Naoya Aida;Masaki Ishihara;Atsushi Kobayashi;Shin-ichiro Shoda;Suzuki I.; Kiyokawa K.; Yasuda M.; Baba A;小林厚志,瀬野宗,黄偉峻,野口真人,片山高嶺,正田晋一郎
• 通讯作者: 小林厚志,瀬野宗,黄偉峻,野口真人,片山高嶺,正田晋一郎

アマドリ転位反応を経由するタンパク質への化学酵素的糖鎖導入プロセス

通过 Amadori 重排反应将化学酶聚糖引入蛋白质的过程

• 发表时间: 2012
• 作者: 内田大介,甲斐拓也,松本和也;寺境光俊;金子由季;小林厚志,吉田尚生,酒井謙介,相沢健太,正田晋一郎
• 通讯作者: 小林厚志,吉田尚生,酒井謙介,相沢健太,正田晋一郎

均一な分子量をもつ糖タンパク質の合成

分子量均一的糖蛋白的合成

• 发表时间: 2012
• 作者: 徳渕陽一;斎藤礼子;吉田尚生
• 通讯作者: 吉田尚生

糖タンパク質合成のためのアマドリ転位反応高効率化戦略

提高糖蛋白合成阿马多里重排反应效率的策略

• 发表时间: 2011
• 作者: A. Priimagi;A. Shimamura;M. Kondo;T. Hiraoka;S. Kubo;J. Mamiya;M. Kinoshita;T. Ikeda and A. Shishido;小林厚志,熊谷雄志,正田晋一郎
• 通讯作者: 小林厚志,熊谷雄志,正田晋一郎

Enzymatic Lactosylation Reaction by Using Cel12A from Trichoderma reesei

使用来自里氏木霉的 Cel12A 进行酶促乳糖基化反应

• 发表时间: 2010
• 作者: Masaki Ishihara;Atsushi Kobayashi;Masato Noguchi;Shin-ichiro Shoda
• 通讯作者: Shin-ichiro Shoda