関節リウマチにおけるカルパイン切断型インターロイキン33の役割

钙蛋白酶裂解的白细胞介素 33 在类风湿性关节炎中的作用

• 批准号: 22790939
• 负责人: 松山 泰
• 金额: $ 1.58万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22790939/
• 关键词: 関節リウマチ; サイトカイン; インターロイキン33; ST2; カルパイン

同意を得た関節リウマチ(RA)患者の血清(46例)もしくは関節液(27例)を用いて、ELISAにてインターロイキン33(IL-33)濃度を測定した。その他、IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-17についても測定を行った。結果、抗TNF治療抵抗性のRAにおいて、持続的な血清および関節液IL-33濃度の上昇を認めた。また、関節液IL-33濃度とIL-1β濃度との間には統計学的有意な正の相関が認められた。続いて、培養実験を行い、RA患者由来の線維芽細胞様滑膜細胞(FLS)において、IL-1βが比較的特異性の高いIL-33の誘導因子であることを証明した。これは、関節液IL-33濃度とIL-1β濃度との間に正の相関が認められた結果と関連付けられ、抗TNF治療抵抗性のRAにおいて血清と関節液とのIL-33濃度が高い理由として、IL-1β/IL-33系の持続的な活性が関連すると結論付けた。続いて、血清および関節液を用いてウェスタンブロッティングを行い、抗ヒトIL-33抗体を用いてIL-33タンパク質の検出を行った。ウェスタンブロッティングでは約30KDa付近にELISAの検出値と相関するバンドが認められ、その他に検体によって25KDa、20KDa、15KDa付近にバンドが検出された。約30KDaのバンドはFLSにおいて発現するIL-33タンパク質とほぼ同じ分子量であり、活性型IL-33と考えられた。25KDa付近のバンドはヒトのサンプルにおいて恒常的に発現しており、非特異的なバンドの可能性が高かった。一方、20KDa、15KDaのバンドは一部の検体で検出され、その分子量より我々が発表した(Biochem Biophys Res Commun 2009;387:218-22)カルパイン切断型IL-33の可能性が示唆された。しかしながら、IL-33はカスパーゼ-3、-8など様々なプロテアーゼで修飾されることが近年報告されており、検出されたものがカルパイン切断型IL-33と断定できていない。今後、カルパインを誘導ないし阻害する条件下にてIL-33タンパク質の発現変化を観察する。また、エドマン分解によるカルパイン切断部位の同定や、カルパイン切断型IL-33の機能解析を行いたい。

使用ELISA使用血清（46例）或联合液（27例）来自同意的类风湿关节炎患者（RA），使用ELISA测量白介素33（IL-33）浓度。另外，还测量了IL-1β，TNFα，IL-6，IL-8和IL-17。结果，在抗TNF治疗的RA中观察到血清和关节液IL-33浓度的持续增加。此外，在关节流体IL-33和IL-1β的浓度之间观察到统计学上显着的正相关。随后，进行了培养实验，以证明IL-1β是源自RA患者的成纤维细胞样细胞（FLS）IL-33的相对特异性诱导剂。这与关节流体IL-33浓度与IL-1β浓度之间存在正相关的结果，并得出结论，IL-1β/IL-33系统的持续活性与抗TNF治疗抗性RA中血清和关节流体之间的IL-33高浓度有关。随后，使用血清和关节液进行蛋白质印迹，并使用抗人IL-33抗体检测IL-33蛋白。蛋白质印迹显示，带有标本约为25 kDa，20 kDa和15 kDa的其他频段与ELISA检测值相关，并通过标本检测到其他带。大约30 kDa带的分子量与以FLS表达的IL-33蛋白的分子量大致相同，并且被认为是IL-33的活性形式。大约25KDA的乐队在人类样品中的组成型表达，更有可能是非特异性频段。同时，在某些标本中检测到20和15 kDa频段，并且20 kDa和15 kDa频段的分子量表明我们发表了Calpain截断的IL-33的可能性（Biochem Biophys Res Commun Res 2009; 387：218-22）。但是，近年来据报道，IL-33通过各种蛋白酶（例如caspase-3和-8）进行了修饰，并且尚未证实检测到的IL-33被截断。将来，在诱导或抑制钙蛋白酶的条件下，将观察到IL-33蛋白表达的变化。此外，我们想通过Edman的降解来识别Calpain裂解位点，并分析Calpain裂解类型IL-33的功能分析。

项目成果

Sustained elevation of interleukin-33 in serum and synovial fluid associated with a poor response of rheumatoid arthritis to anti-tumor necrosis factor therapy.

血清和滑液中白细胞介素 33 持续升高与类风湿性关节炎对抗肿瘤坏死因子治疗反应不佳相关。

• 发表时间: 2010
• 作者: Nishikawa;Y.;Mouri;Y.;Nishijima;H.;and Matsumoto;M;Yasushi Matsuyama
• 通讯作者: Yasushi Matsuyama

Elevated serum IL-33 levels in patients with refractory rheumatoid arthritis to anti-TNF therapy.

抗 TNF 治疗导致难治性类风湿关节炎患者血清 IL-33 水平升高。

• 发表时间: 2010
• 作者: Matsumoto;M.;et al.;Yasushi Matsuyama
• 通讯作者: Yasushi Matsuyama