関節リウマチにおけるカルパイン切断型インターロイキン33の役割

钙蛋白酶裂解的白细胞介素 33 在类风湿性关节炎中的作用

• 批准号: 22790939
• 负责人: 松山 泰
• 金额: $ 1.58万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22790939/
• 关键词: 関節リウマチ; サイトカイン; インターロイキン33; ST2; カルパイン

同意を得た関節リウマチ(RA)患者の血清(46例)もしくは関節液(27例)を用いて、ELISAにてインターロイキン33(IL-33)濃度を測定した。その他、IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-17についても測定を行った。結果、抗TNF治療抵抗性のRAにおいて、持続的な血清および関節液IL-33濃度の上昇を認めた。また、関節液IL-33濃度とIL-1β濃度との間には統計学的有意な正の相関が認められた。続いて、培養実験を行い、RA患者由来の線維芽細胞様滑膜細胞(FLS)において、IL-1βが比較的特異性の高いIL-33の誘導因子であることを証明した。これは、関節液IL-33濃度とIL-1β濃度との間に正の相関が認められた結果と関連付けられ、抗TNF治療抵抗性のRAにおいて血清と関節液とのIL-33濃度が高い理由として、IL-1β/IL-33系の持続的な活性が関連すると結論付けた。続いて、血清および関節液を用いてウェスタンブロッティングを行い、抗ヒトIL-33抗体を用いてIL-33タンパク質の検出を行った。ウェスタンブロッティングでは約30KDa付近にELISAの検出値と相関するバンドが認められ、その他に検体によって25KDa、20KDa、15KDa付近にバンドが検出された。約30KDaのバンドはFLSにおいて発現するIL-33タンパク質とほぼ同じ分子量であり、活性型IL-33と考えられた。25KDa付近のバンドはヒトのサンプルにおいて恒常的に発現しており、非特異的なバンドの可能性が高かった。一方、20KDa、15KDaのバンドは一部の検体で検出され、その分子量より我々が発表した(Biochem Biophys Res Commun 2009;387:218-22)カルパイン切断型IL-33の可能性が示唆された。しかしながら、IL-33はカスパーゼ-3、-8など様々なプロテアーゼで修飾されることが近年報告されており、検出されたものがカルパイン切断型IL-33と断定できていない。今後、カルパインを誘導ないし阻害する条件下にてIL-33タンパク質の発現変化を観察する。また、エドマン分解によるカルパイン切断部位の同定や、カルパイン切断型IL-33の機能解析を行いたい。

It was agreed that the serum (46 cases) and synovial fluid (27 cases) of patients with joint arthritis (RA) should be measured using ELISA and the concentration of IL-33 (IL-33).そのhis, IL-1β, TNFα, IL-6, IL-8, IL-17 are measured by を行った. As a result, it was found that the IL-33 concentration in the serum and synovial fluid of the patients with resistance to anti-TNF treatment increased and the IL-33 concentration in the serum and synovial fluid continued to increase. There is a statistically significant correlation between the concentration of IL-33 in synovial fluid and the concentration of IL-1β in synovial fluid. The specificity of IL-33 inducing factor, IL-33 induction factor, and IL-1β have been proven to be higher than those of RA patients.これは, synovial fluid IL-33 concentration and IL-1β concentration との间に正のassociated がcognition められたRESULT とrelated payment けられ, anti-TNF treatment resistance のRA The reasons for the high concentration of IL-33 in serum and synovial fluid are related to the activity of IL-1β/IL-33 system and the conclusions are drawn.続いて, serum および synovial fluid を Use いてウェスタンブロッティングを行い, The anti-HTIL-33 antibody is produced using the HTIL-33 antibody.ウェスタンブロッティングではabout 30KDa ELISAの検出値とrelated するバンドがidentificationめられ、そのhis に検体によって25KDa, 20KDa, 15KDa Pay close to にバンドが検出された. About 30KDa のバンドはFLS において発成するIL-33 タンパクquality とほぼ Same molecular weight であり, active type IL-33 えられた. 25KDa pays close attention to the high-precision high-precision non-specific high-precision high-precision products. One side, 20KDa, 15KDa のバンドは一の検体で検出され, その molecular weight より我々が発表した(Biochem Biophys Res Commun 2009;387:218-22) The possibility of カルパイン cut-off IL-33 is revealed.しかしながら、IL-33はカスパーゼ-3、-8など様々なプロテアーゼでmodificationされることがRecent reports of されており, 検出されたものがカルパイン cut-off type IL-33 and できていない. From now on, under the conditions of カルパインをinduced ないしblocking and する, にてIL-33 タンパクquality の発 is now changed into を禳看する.また, エドマン decomposition によるカルパイン cutting part の Same setting や, カルパイン cutting type IL-33 functional analysis を行いたい.

项目成果

Sustained elevation of interleukin-33 in sera and synovial fluids from patients with rheumatoid arthritis non-responsive to anti-tumor necrosis factor: possible association with persistent IL-1β signaling and a poor clinical response

• DOI: 10.1007/s00296-011-1854-6
• 发表时间: 2012-05-01
• 期刊: RHEUMATOLOGY INTERNATIONAL
• 影响因子: 4
• 作者: Matsuyama, Yasushi;Okazaki, Hitoaki;Minota, Seiji
• 通讯作者: Minota, Seiji

Sustained elevation of interleukin-33 in serum and synovial fluid associated with a poor response of rheumatoid arthritis to anti-tumor necrosis factor therapy.

血清和滑液中白细胞介素 33 持续升高与类风湿性关节炎对抗肿瘤坏死因子治疗反应不佳相关。

• 发表时间: 2010
• 作者: Nishikawa;Y.;Mouri;Y.;Nishijima;H.;and Matsumoto;M;Yasushi Matsuyama
• 通讯作者: Yasushi Matsuyama

Elevated serum IL-33 levels in patients with refractory rheumatoid arthritis to anti-TNF therapy.

抗 TNF 治疗导致难治性类风湿关节炎患者血清 IL-33 水平升高。

• 发表时间: 2010
• 作者: Matsumoto;M.;et al.;Yasushi Matsuyama
• 通讯作者: Yasushi Matsuyama