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患者由来iPS細胞を用いた統合失調症分子基盤の解明

使用患者来源的 iPS 细胞阐明精神分裂症的分子基础

基本信息

批准号：
22791141
负责人：
堀内泰江
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22791141/
关键词：
統合失調症遺伝子 iPS細胞脳分化神経科学発生酸化ストレス

项目摘要

統合失調症の生物学的基盤を分子レベルで明らかにする上で、患者由来組織の解析は最も直接的なアプローチであることから、これまでに統合失調症患者死後脳を用いた解析が行われてきた。しかし、死後脳サンプルは死後時間、死因によるpHの変化、死後脳サンプルの凍結融解など考慮すべき点が多く、また、長期にわたる薬物療法、喫煙、薬物乱用のため死後脳の変化が疾患による一次的なものか、薬物による二次的変化なのかを明らかにすることが困難であり注意深い結果の解釈を要求されていた。近年、山中らによりヒト線維芽細胞から人工多能性幹細胞(induced pluripotent stem cell:iPSC)が作製できることが報告され(Takahashi et al.Cell 2007,Park et al.Cell 2008)、この作成技術を用いた疾患特異的iPSCの解析は新たな研究リソースとして注目されている。我々は、統合失調症患者5例,健常対照者2例の線維芽細胞よりiPS細胞の樹立に成功した。iPSCコロニーの品質評価としてRetrovirusによって導入された遺伝子(Oct3/4,Sox2,Klf4,c-Myc)のサイレンシングの確認。Teratoma形成。Embryoid body(EB)の形成率、未分化マーカー(NANOG、SSEA1、TRA-1-60等)の発現の確認、さらにNeurosphere-based culture system(Okada et al.2008)を用いてneurosoheareの形成効率、RT-PCRによる神経系マーカー(SOX1,NCAM)の発現量、コロニーのmorphologyをもとに各サンプル6クローンずつの解析に用いるクローンを選択した。患者由来細胞と対照群由来iPSCから選択した各クローンからDopamine NeuronなどProjection Neuronや、Interneuronへの分化誘導を行った。今後、これらの細胞を用いてマイクロアレイ解析、メタボローム解析、患者由来細胞内における酸化ストレス反応性・抗精神病薬反応性の検討等を行う。

The basic molecular basis of the disorder's biology and the most direct analysis of the origin of the patient's tissue The analysis done by the patient who died after the death of a patient with integrated disorder and the analysis of the が行われてきた by the なアプローチであることから.しかし, after death 脳サンプルは time after death, cause of death によるpHの剉化, after death 脳サンプルFreezing and thawing treatment considers すべき点が多く, また, long-term にわたる薬药therapy, smoking, 薬物Indiscriminate use of のため after death 脳の剉化が Disease による once なものか, 薬物による twiceなのかを明らかにすることが Difficulty でありNote deep いresult のsolved 釈をRequirement されていた. In recent years, reports on the production of artificial pluripotent stem cells (iPSC) by Yamanaka Yamanaka (Takahashi et al. Cell 2007, Park et al. Cell 2008), new research and development of disease-specific iPSC analysis and production technology, and focus on research and development. In our study, 5 patients with integration disorder and 2 healthy patients were successfully established with fibroblast cells and iPS cells. Quality evaluation of iPSC コロニーのとしてRetrovirus によって imported された伝子(Oct3/4,Sox2,Klf4,c-Myc)のサイレンシングのconfirmation. Teratoma formation. Embryoid body (EB) formation rate, confirmation of undifferentiated マーカー (NANOG, SSEA1, TRA-1-60, etc.), and さらにNeurosphere-based culture system (Okada et al. al.2008) Used neurosoheare formation efficiency, RT-PCR SOX1, NCA M) の発真quant, コロニーのmorphologyをもとにeach サンプル6 クローンずつのANALYSIS いるクローンを选択した. Patient-derived cells and group-derived iPSCs are selected and selected. From now on, we will use いてマイクロアレイ analysis, メタボローム analysis, and patients The origin of intracellular acidification, reaction, and antipsychotic reaction.