Development of a novel inspection method to observe intracellular molecular movement : an application of fluorescence correlation spectroscopy(FCS)

开发一种观察细胞内分子运动的新型检测方法：荧光相关光谱（FCS）的应用

• 批准号: 22790531
• 负责人: TANAKA Shotaro
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22790531/
• 关键词: 蛍光相関分光法(FCS); マイクロインジェクション; モノクローナル抗体; 抗体; protein 4.1R; 臨床検査医学; PKCβ

Anti-GFP mouse monoclonal antibody was labeled specifically on Fc region by red fluorescent dye. The antibody was injected into HeLa cells that stably expressed PKCβ-GFP. The formation of specific interaction between the antibody and PKCβ-GFP in the cells was demonstrated by analyzing with fluorescence cross-correlation spectroscopy(FCCS), but the interaction completely inhibited the translocation function of PKCβto plasma membrane. To avoid the formation of antibody cross-linking, a Fab fragment was prepared from anti-protein 4.1R antibody expressed by hybridoma, as a new candidate of the present study. Now the antibody function of the Fab fragment is being verified in the cells.

抗GFP鼠单克隆抗体通过红色荧光染料特异性标记在Fc区。将抗体注射到稳定表达PKCβ-GFP的HeLa细胞中。荧光交叉相关光谱（FCCS）分析表明，抗体与PKCβ-GFP在细胞内形成了特异性的相互作用，但这种相互作用完全抑制了PKCβ向质膜的转位功能。为了避免抗体交联的形成，我们从杂交瘤表达的抗4.1R蛋白抗体中制备了Fab片段，作为本研究的新候选抗体。目前，Fab片段的抗体功能正在细胞中得到验证。

项目成果

Observation of interaction between membrane skeletal protein and transmembrane protein on transporting vesicle and plasma membranes using fluorescence correlation spectroscopy (FCS)

使用荧光相关光谱（FCS）观察膜骨架蛋白和跨膜蛋白在运输囊泡和质膜上的相互作用

• 发表时间: 2011
• 作者: 宿里充穗;高島好聖;尾上浩隆;楳田祐三;楳田祐三;Shotaro Tanaka
• 通讯作者: Shotaro Tanaka

新しい細胞内分子診断法の開発-蛍光相関分光法(FCS)の臨床検査への応用-

开发新的细胞内分子诊断方法 - 荧光相关光谱（FCS）在临床检测中的应用 -

• 发表时间: 2011
• 作者: 田中正太郎;高桑雄一
• 通讯作者: 高桑雄一

Intracellular interactions between protein 4.1 and glycophorin C on transport vesicles, as determined by fluorescence correlation spectroscopy

通过荧光相关光谱法测定运输囊泡上蛋白质 4.1 和血型糖蛋白 C 之间的细胞内相互作用

• 发表时间: 2012
• 期刊: FEBS letters
• 影响因子: 3.5
• 作者: Tanaka S;Takakuwa Y;計2名
• 通讯作者: 計2名

膜骨格タンパク質protein 4.1は輸送小胞を介して細胞膜へ輸送される:蛍光相関分光法(FCS)を用いた観察

膜骨架蛋白蛋白4.1通过转运囊泡转运至细胞膜：使用荧光相关光谱（FCS）观察

• 发表时间: 2011
• 作者: 宿里充穗;高島好聖;尾上浩隆;楳田祐三;楳田祐三;Shotaro Tanaka;楳田祐三;宿里充穗,高島好聖,徳田景子,松村潔,土居久志,鈴木正昭,渡辺恭良,尾上浩隆;田中正太郎
• 通讯作者: 田中正太郎

Intracellular interactions between protein 4.1 and glycophorin C on transport vesicles, as determined by fluorescence correlation spectroscopy Reference

转运囊泡上蛋白质 4.1 和血型糖蛋白 C 之间的细胞内相互作用，通过荧光相关光谱法测定参考文献

• 发表时间: 2012
• 期刊: FEBS LETTERS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Shotaro Tanaka;Yuichi Takakuwa
• 通讯作者: Yuichi Takakuwa