遺伝子タギング法による糸状菌セルラーゼ遺伝子発現制御因子の同定とその機能解析

使用基因标签和功能分析鉴定丝状真菌纤维素酶基因表达调节因子

• 批准号: 11J10697
• 负责人: 國武 絵美
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J10697/
• 关键词: cellobiose-and cellulose responsive induction; (ヘミ)セルラーゼ; 遺伝子発現制御; cellobiose response regulator C1bR; Aspergillus aculeatus; cellobiose response regulator ClbR

本研究はおAspergillus aculeatusにおける(ヘミ)セルラーゼ遺伝子の発現制御機構を解明することを目的として、我々が同定した新奇Zn(II)_2Cys_6型転写因子様タンパク質Cellulose response regulator ClbRの機能解析を行い、以下の成果を得た。1.ClbR高発現株における分泌タンパク質の同定及び転写解析olbR高発現株のセクレトーム解析を行い、ClbR制御下で転写が活性化される遺伝子群の中でもその生産量に違いがあることを明らかにした。転写解析でも同様にClbR高発現によるセルラーゼ遺伝子への影響が異なることを見出し、ClbRが他の因子と協調的に機能する可能性があることを示した。2.Yeasttwohybrid法を用いたClbRと相互作用する因子の探索既知の糖質加水分解酵素遺伝子の転写活性化因子とClbRパラログからClbRと相互作用する因子を探索し、ClbRと相同性42%のパラログ(ClbR2)を単離した。遺伝子破壊株を用いた転写解析より、ClbRとClbR2はセルロース性基質を誘導剤とした際に、同一経路を介してセルラーゼ遺伝子の経路特異的転写活性化因子ManRを制御し、セルラーゼ遺伝子の発現に寄与することを明らかにした。3.ClbRの機能ドメイン解析C末端側から順次欠損した変異体を用いた解析からC末端側105aa内に転写活性化能を有することを示した。GFP融合タンパク質として発現させた各変異体の局在を観察した結果、推定DNA結合ドメイン内に核移行シグナルが存在することが示唆された。4.T-DNAタギング法を用いた新奇セルラーゼ遺伝子発現制御因子の探索ClbRと同手法により,T-DNA挿入遺伝子破壊ライブラリからセルラーゼ遺伝子発現に関与する因子をスクリーニングし,新たに2株のセルラーゼ遺伝子発現制御因子欠損候補株を単離した。

This study is based on Aspergillus aculeatus における(ヘミ)セルラーゼ伝子の発existing control organization を解明することをpurposeとして、我々が同定したNovel Zn(II)_2Cys_6 type 転WRITING FACTOR様タンパクquality Cellulose The functional analysis of response regulator ClbR has been carried out, and the following results have been obtained. 1. ClbR Takaharu genus におけるsecretory タンパク性の同determination and び転WRITE analysis olbR 高発开户のセクレトームanalytic をThe production volume of the row and the ClbR control under the control of the activation of the remaining subgroups are high and the production volume is high.転WRITING ANALYSISとを见出し、ClbR がhis の factor と に function する possibility が あ る こ と を Show し た. 2. The Yeasttwohybrid method is used to explore the known saccharide hydrolyzing enzyme residues and write the activation factors using ClbR and interaction factors. SubとClbRパラログからClbRとinteraction factorをexplorationし, ClbRとidentity 42%のパラログ(ClbR2)を単leaveした. The remaining をいた転写analytic より, ClbRとClbR2 はセルロース性stromをinducing としたinteriorに, the same 経路を Introduction してセルラーゼ缝子の経路-specific 転activation factor ManRをcontrolし, セルラーゼ缝子の発行出 and することを明らかにした. 3. The function of ClbR is to analyze the C-terminal side of the sequentially missing variant and to analyze the C-terminal side of the 105aa internal activation energy. The result of GFP fusion is the same as that of each variant. It is presumed that the existence of DNA-binding nucleic acid transfer in the nucleus is the reason why it exists. 4. The T-DNA method is used to explore the novel control factors of ClbR, and the T-DNA insertion method is used to explore the control factors.ラリからセルラーゼ伝子発appears the pass and the するfactor をスクリーニングし, Two new strains of のセルラーゼ弝子発 are now candidates for loss of control factors, を単里した.

项目成果

A novel Cys6 zinc binuclear cluster protein regulating the cellulose induction of both cellulase and hemicellulase gene expressions in Aspergillus aculeatus

一种新型 Cys6 锌双核簇蛋白调节棘孢曲霉中纤维素酶和半纤维素酶基因表达的纤维素诱导

• 发表时间: 2011
• 作者: Emi Kunitake;Shuji Tani;Jun-ichi Sumitani;Takashi Kawaguchi
• 通讯作者: Takashi Kawaguchi