抗菌ペプチドｈｕｍａｎ　β－ｄｅｆｅｎｓｉｎ－２を用いた口腔感染症治療への応用

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8週齢（遺伝子導入０週目）のマウス顎下唾液腺に，カニュレーション法によってrAAV-hbd-2を遺伝子導入した。陰性対照として，リン酸緩衝液（PBS）およびrAAV-gfpを用いた。8週目に唾液腺を採取しβ-actinに対するhbd-2発現を確認したところ，hBD-2群はΔΔCT値が226.4であり，PBS群およびGFP群は1.6と0.4であった。4～8週目に無麻酔下で口腔内細菌を採取し，DNAを抽出し16SリボゾームDNAを増幅させるオリゴDNAプライマーを用いてreal-time PCR法で総菌数を検出したところ，期間を通じて徐々に増加したが群間の差は見られなかった。また，口腔内病原性細菌Aggregatibacter actinomycetemcomitans（Aa）をマウス口腔内に人工的に添加し，定着を阻害できるか調べるため，4，5週目に口腔内にAaの懸濁液を合計4回滴下した。前述の口腔内細菌DNA抽出液を用いて，real-time PCR法でAaの菌数を検出した。5週目にはAaの菌数に群間差はなく，8週目にはどの群も検出限界値以下となった。総菌数およびAaの菌数の結果から，この方法ではどの群も口腔内にAaが定着しなかったと考える。さらに，8週目の口腔内細菌叢をT-RFLP法によって調べた。16SリボゾームDNAの各菌共通の配列部分を約1500bp増幅させる蛍光標識プライマーを用いて，得られたPCR産物を制限酵素MspIで切断し，蛍光強度とDNA 断片長を解析した。その結果，hBD-2群において陰性対照群と比較して401～600bp以下のDNA 断片の割合が減少し，601bp以上のDNA断片の割合が増加していた。以上の結果から，hBD-2の遺伝子導入によって，人工的に添加されたAaの定着への影響は判定できなかったが，マウス口腔内の菌叢を変化させた可能性がある。