ウイルスベクターを用いた幹細胞相同組換え法の開発と治療モデルへの応用

利用病毒载体开发干细胞同源重组方法及其在治疗模型中的应用

• 批准号: 11F01414
• 负责人: 三谷 幸之介
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11F01414/
• 关键词: 遺伝子治療; iPS細胞; 遺伝子修理; 造血系遺伝病; アデノウイルスベクター; TALEN; 遺伝子修復

東北大学より分与される予定のSCID-X1患者由来の体細胞がいまだに入手不可能であるため、昨年度、Stanford大学のMatt Porteus博士との共同研究で、男性由来正常iPS細胞のIL2RG遺伝子座のエクソン1を標的として、人工制限酵素TALENを用いた遺伝子ノックアウトにより変異を導入した。今年度は、このiPS細胞より線維芽細胞を誘導した。元のiPS細胞といくつかの代表的な遺伝子の発現の有無の解析を行い、分子レベルで線維芽細胞である事を確定した。この細胞を用い、今後、センダイウイルスを用いてiPS細胞に誘導しながら、それと同時にHDAd-hIL2RGアデノウイルスベクターを用いた遺伝子修復を行う。昨年度までに構築した、感染後に造血前駆細胞特異的にEGFPを発現するHDAd-HOXB4-EGFPベクターDNAの特異性を比較したところ、本来発現するはずのK562細胞で発現が見られなかった。そこで、細胞レベルでのこのレポーターの機能を確認する目的で、このレポーターがノックインされたhiPSC/HOXB4-EGFP細胞株を、HDAdV感染による遺伝子ターゲッティングで樹立した。今後、この細胞を造血系に分化誘導した際にEGFPが得られるかを、詳細に検討する予定である。

Tohoku University and a co-study with Dr. Matt Porteus of Stanford University last year found that IL-2RG gene loci from male-derived normal iPS cells were targeted and artificially restricted by TALEN. This year, the iPS cells were induced. IPS cells represent the development of DNA and its presence or absence is analyzed. Molecular DNA is determined. These cells are used in the future, and they are used in the induction of iPS cells. At the same time, HDAd-hIL2 RG is used in the repair of iPS cells. In the past year, EGFP specific to hematopoietic progenitor cells was found in HDAd-HOXB4-EGFP cells after construction and infection. To confirm the function of the cell line, the hiPSC/HOXB4-EGFP cell line and the HDAdV infected cell line. In the future, the differentiation of hematopoietic cells will be determined by EGFP.