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脊椎動物未受精卵の分裂停止因子Emi2の活性制御機構の解析

脊椎动物未受精卵有丝分裂阻滞因子Emi2活性调控机制分析

基本信息

批准号：
11J00139
负责人：
迫洸佑
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J00139/
关键词：
細胞周期 Emi2 APC/C Ube2S Cdk1 PP2A

项目摘要

脊椎動物の未受精卵は第二減数分裂中期(Meta-II)で分裂を停止し、受精を待つ。Meta-II停止を引き起こす因子のエフェクターとして、APC/C (Anaphase promoting complex/cyclosome)抑制能をもつEmi2 (Early mitotic inhibitor 2)が知られている。Emi2は、自身のC末端に存在するRL tailを介してAPC/Cと結合する。本研究は、Emi2の活性化および安定化の分子メカニズムの解明も目的としており、Emi2が結合するAPC/Cサブユニットの特定が非常に重要であると考えられた。その結合の際に、Emi2がAPC/Cの活性化に必要な因子を排除するのではないかと仮定し、前年度の研究を進めた。その結果、RL tai1とアミノ酸配列が非常に酷似したC末端をもつUbe2S (E2ユビキチン結合酵素)がその候補として浮上した。そこで私は、Emi2がAPC/Cと結合する際に、APC/Cの同一サブユニット上でUbe2Sと競合することでMeta-II停止を引き起こしているのではないかと仮説を立て、本年度の研究を行った。まず、Meta-II停止時のツメガエル卵抽出液を用いて、APC/Cの免疫沈降を行った。すると、受精刺激後にEmi2が分解される際に、Ube2SとAPC/Cとの結合がMeta-II停止時に比べ4～5倍に上昇すること、その結合上昇にはEmi2の分解(APC/CからのEmi2の解離)が必須であることが分かった。次に、Rabbit Reticulocyte Lysate (RRL)で発現させたAPC/Cサブユニットを用いた実験から、Emi2およびUbe2SはAPC/CのコアサブユニットであるAPC10と結合することが分かった。以上の結果から、Meta-II停止時において、Emi2はRL tailを介してAPC10と結合しUbe2Sと競合していることが強く示唆された。また、この結果は国際的にも高い評価を受け、平成26年3月17日付けでNature Communications誌に受理され、現在印刷中である。

The unfertilized egg of vertebrates has stopped dividing during the second metaphase of meiosis (Meta-II) and is waiting for fertilization. Meta-II stops the action of the factor, the inhibitor of APC/C (Anaphase promoting complex/cyclosome), and the inhibitor of Emi2 (Early mitotic inhibitor 2). Emi2's own C-terminal existence and RL tail are introduced and APC/C is combined. The purpose of this study is to clarify the molecular structure of activation and stabilization of Emi2, Emi2 is a very important combination of APC/C program. The factors that are necessary for the activation of Emi2 and APC/C are eliminated, and the research of the previous year is carried out. As a result, the RL tai1 とアミノ acid complex is very similar to the した C-terminal をもつUbe2S (E2 ユビキチン conjugating enzyme) がその candidate として上した.そこでprivateは, Emi2がAPC/Cとcombinationするinteriorに, APC/Cの同サブユニット上でUbe2SとCompetition合することでMeta-II stops をinduced きrise こしているのではないかと仮说を立て、This year's research を行った. When Meta-II is stopped, the egg aspirate aspirated liquid is used, and the immunoprecipitation of APC/C is performed.すると, にEmi2 が decomposition after fertilization stimulation されるinterior に, Ube2S とAPC/C との combination がMeta-II stopped に比べ 4～5にRISING すること、そのcombination risingにはEmi2のlysis(APC/CからのEmi2のdissociation)がmustであることが分かった. Tsuki, Rabbit Reticulocyte Lysate (RRL)で発成させたAPC/Cサブユニットを用いた実験から、Emi2およびU be2SはAPC/CのコアサブユニットであるAPC10とcombinationすることが分かった. The results of the above are から, Meta-II stops において, Emi2 RL tail を Introduction してAPC10 とcombination しUbe2S とCompetition していることがstrong く Show 唆された.また, このRESULTS は International にも高い価をReceived け, けでNature Communications Journal accepted on March 17, Heisei 26, である is currently being printed.