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TRPV4チャネルを介した体温調節機構の解明

TRPV4通道介导的体温调节机制的阐明

基本信息

批准号：
11J02383
负责人：
高山靖規
金额：
$ 0.83万
依托单位：
The Graduate University for Advanced Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J02383/
关键词：
TRPV4 アノクタミン1 脈絡叢上皮細胞体温調節寒冷暴露

项目摘要

transient receptor potential vanilloid 4チャネル(TRPV4)は視床下部・正中視索前野での発現が報告されている非選択的カチオンチャネルであるが、これまでその役割はほとんど解明されてこなかった。特に、TRPV4発現ニューロンを可視化することが困難であったため、電気生理学的検討が全く進んでいなかった。そこで、申請者はテトラサイクリン応答性配列とテトラサイクリン感受性転写活性化因子を2A配列を用いて繋げたトランスジェニックマウスを作成した。この遺伝子改変マウスでは、TRPV4陽性細胞においてEGFPがプロモーター活性とは独立して無制限に発現することが期待されたが、実際にこのシステムはin vivoでは機能しておらず、EGFP発現は本来のTRPV4プロモーター活性に依存しているものと考えられた。そのため、ニューロンにおいてはEGFP発現をもとにTRPV4陽性細胞を見分けることができなかった。しかしながら、脈絡叢上皮細胞(CPEC)においては明確なEGFP発現を観察できた。CPECは脳室内に存在している細胞であり、脳脊髄液分泌を司っている。免疫染色を行った結果、深部体温下で活性化し得るTRPV4のCPEC脳室側での局在が示された。そのため、TRPV4は脳脊髄液分泌に影響するであろうことが考えられたが、これまでその分子機構は明らかにされでいない。これに加えて、これまで未発見であったCPECにおけるカルシウム活性化クロライドチャネルの存在を明らかにした。また、その分子実体が近年クローニングされたアノクタミン1であることも明らかとした。さらに、TRPV4の活性化に伴い流入したカルシウムによってアノクタミン1が強く活性化することをHEK293T細胞と単離したCPECにおけるホールセルパッチクランプ法によって明らかにした。TRPV4とアノクタミン1において証明された機能連関は他のカルシウム透過性チャネルにおいても同様であることが考えられるため、今後はCPECのみならず、アノクタミン1の好発部位である後根神経節や顎下腺、気管上皮などにおいてもこの機能連関の生理的役割が解明されていくものと期待される。

Transient receptor potential vanilloid 4 (TRPV4) is reported to occur in the lower part of the optic bed and in the middle of the optic cord. Special, TRPV4 development, visualization, electrophysiological discussion, full progress For example, the applicant may choose to use the 2A assignment method to create the response assignment method. This gene modification is expected in TRPV4-positive cells, and EGFP expression is dependent on TRPV4-positive activity. EGFP expression is expected in vivo, and EGFP expression is dependent on TRPV4-positive activity. TRPV4 positive cells were found in the cells. The presence of EGFP in choroid plexus epithelial cells (CPEC) was clearly detected. CPEC is a cell that exists in the interior and secretes spinal fluid. The results of immunostaining showed that TRPV4 was activated at deep body temperature and the CPEC was still active. TRPV4 is a molecular mechanism for the secretion of spinal fluid. This is the first time that CPEC has been activated. In recent years, the number of sub-units has increased. The activation of TRPV4 in HEK293 T cells and CPEC is accompanied by the influx of TRPV 4 into HEK293 cells and the activation of HEK293T cells. TRPV4 and TRPV 1 demonstrate that the functional link is related to the transmission of other cells, and the physiological link between the functional link and the physiological link is expected to be clarified in the future.