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不応性貧血の病態解明を目的とした赤芽球分化成熟誘導機構の解明

阐明诱导红细胞分化成熟的机制，阐明难治性贫血的病理

基本信息

批准号：
11J02996
负责人：
井上朋子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J02996/
关键词：
赤血球胎仔肝臓脱核終末期分化成熟不応性貧血

项目摘要

平成25年度は、前年度に引き続き、分化成熟制御分子の候補分子の発現解析・機能解析・シグナル解析を行った。(1)候補分子の発現解析 ; 終末期分化成熟関連分子の最終候補分子として膜受容体Yに注目し(特許[特願2012-182058]秘匿事項)研究を推進した。Y発現解析を行う為、抗Yモノクローナル抗体を作製し、最終的に活性が高い2クローンを選出した。ハイブリドーマ培養上清由来及び腹水由来精製抗体を用いてwestern blot法・免疫染色法にてquality checkを行い、クローン29F7の特異性が高いことを確認した。当精製抗体を用いて、ヒト赤白血病細胞株及び末梢血におけるY発現を確認した。(2)候補分子の機能解析 ; 胎生16.5日目のマウス胎仔肝臓より、Y発現細胞を選別し、分子Yに対する±リガンド条件下、赤血球系細胞への分化培養を行った。リガンド添加条件でCD71-/Ter119+(成熟赤血球)細胞への誘導亢進(4.1倍)及びグロビン遺伝子発現亢進を認めた(Hba-a1 ; 3.2倍,」Hbb-b1 ; 5.2倍)。『リガンド―Y』シグナルは終末期赤血球造血を亢進することが示唆された。さらにYに対する中和抗体を共同研究者から入手し、マウスへの投与実験を行った。(3)候補分子のシグナル解析 ; ヒト膀帯血及び末梢血を用いて±リガンド培養後、c-Kit-/CD45-/GPA+分画をフローサイトメトリー法にて採取した。続いてProteome profiler human phospho-kinase array kitを用いて『リガンド―Y』下流のシグナル解析を行った。終末期赤血球分化成熟に関与が示唆されるシグナル分子を最終的に3つに絞り込んだ。全体として終末期赤血球造血に関与する分子を2分子同定し正常マウスにおける発現解析を終了した。このうち1分子に関しては機能解析及び下流のシグナル探索まで終了し、正常終末期赤血球造血における分子基盤を一部解明できた。

In 2015, the first year of the year, the development analysis of candidate molecules for differentiation and maturity control molecules, the functional analysis, and the analysis of the structure were carried out. (1)Analysis of candidate molecules for development; advancement of research on final candidate molecules for terminal differentiation maturation related molecules and membrane receptors Y detection analysis, anti-Y detection antibody production, and final activity selection Western blot and immunostaining were used to confirm the specificity of F7. When purified antibody was used, the expression of Y in leukemia cell lines and peripheral blood was confirmed. (2)Functional analysis of candidate molecules; selection of fetal liver cells at 16.5 days of birth, differentiation of erythroid cells under conditions of molecular Y interaction Under these conditions, CD71-/Ter119+(mature erythrocytes) cells were induced hyperactivity (4.1 fold) and hyperactivity (Hba-a1 ; 3.2 fold; Hbb-b1 ; 5.2 fold) of cytokinin was detected. "The end of the red blood cell hematopoiesis" is the most common cause of death. The co-investigators started to investigate and investigate the neutralizing antibodies. (3)Candidate molecules were analyzed by the C-Kit-/CD45-/GPA+ assay after incubation in vitro and in vitro in vitro. The Proteome profiler human phospho-kinase array kit is used to analyze the protein sequence in the stream. The final stage of erythroid differentiation and maturation is related to the final stage of erythroid differentiation and maturation All the molecules involved in hematopoiesis at the end of the life cycle are stable and stable. The molecular basis for the functional analysis and downstream exploration of these molecules is partially clarified in the end and normal end-stage erythropoiesis