スプライシング異常によるPOLDIP3の機能喪失に着目したALS病態機序の解明

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本研究の目的は, "TDP-43の核外移行による核内でのTDP-43の機能喪失が, POLDIP3遺伝子のスプライシング異常と機能低下を引き起こし, 結果としてmTORシグナルの異常を生じ, 運動神経細胞死を誘導する", という仮説を検証し, ALS病態機序を解明することである. これを達成するため本研究では, 分子病理学的手法を用いた検討を行った.ALS患者運動ニューロンで, 実際にPOLDIP3のスプライシング異常が起こっているかを検討した. ALS患者凍結脊髄組織より凍結切片を作製し, レーザーマイクロダイセクション(LCM)装置を用いて運動ニューロンをサンプリングした. 得られた細胞からtotal RNAを回収し, POLDIP3のスプライシングを評価した. 結果, ALS患者脊髄運動ニューロンにおいて, 培養細胞系で確認されたTDP-43機能低下時のスプライシング変化に一致した変化を認めた.本研究で申請者は, TDP-43の機能喪失がmTORシグナルに関与するPOLDIP3のスプライシング異常を引き起こすことを見出し, それがALS患者運動ニューロンにおいても認められることを明らかとした. しかしながら, このスプライシング異常が運動ニューロンに与える影響に関する実験は, その準備のみに留まった. 今後は, 今年度準備した手法を用い, この現象のALS病態との関連をより綿密に検討する.