精原幹細胞の内因的自己複製能維持機構の解明

阐明精原干细胞内源性自我更新维持机制

• 批准号: 11J09354
• 负责人: 白川 峰征
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J09354/
• 关键词: エピジェネティクス; 乾細胞; 生殖細胞; 幹細胞; 精巣

3年間の目標は、精原幹細胞独特な遺伝子発現抑制系と、この系が関与している遺伝子群の網羅的解析にある。網羅的解析として、Plzfと相互作用するタンパク質群をプロテオーム解析および、Plzfのゲノム上における結合領域を明らかにするために行うクロマチン免疫沈降-シークエンス解析を行うことを目標とした。HAタグ(クロマチン免疫沈降-シークエンス解析において使用)、SBPタグ(プロテオーム解析において使用)、Flagタグの3種類のタグ付きPlzfが発現することのできるベクターを構築した。まず、293FT細胞株に構築したベクタープラスミドをトランスフェクションし、実際にタグ付きのPlzfが発現するかどうかについて、ウエスタンブロット法を用いて確認した。確認後、SBPタグを利用して、抗SBP抗体を用いた免疫沈降実験を行った。その結果、実際にPlzfに結合しているタンパク質の沈降が見られ、免疫沈降実験系構築の確認をすることができた。さらに培養i系精原幹細胞(GS細胞)における、Plzfと相互作用するタンパク質の同定を目指して、GS細胞にタグ付きPlzfを発現させたいと考えた。しかしながら、GS細胞では、通常のトランスフェクションでは遺伝子導入が難しいことが知られている。そこで、構築したプラスミドを元に、タグ付きPlzfを発現させることのできるレンチウイルスベクターを構築した。構築したベクターを使用してレンチウイルスを産生し、ウイルス液の濃縮を行った。作製したレンチウイルスをGS細胞に感染させたところ、感染がセルソーターにより確認され、タグ付きPlzf発現GS細胞の作製に成功した。

The purpose of this study is to analyze the relationship between the inhibition system of spermatogonial stem cell unique gene development and the network of spermatogonial stem cell unique gene development. The analysis of the network, Plzf interaction, Plzf interaction, Plzf interaction HA, SBP and Flag are three types of immune sedimentation. The structure of 293FT cell line was confirmed by the method of "identification" and "identification". After confirmation, SBP was used. The results of this study were as follows: (1) The results of the study were as follows: (2) The results of the study were as follows: In this paper, the development of spermatogonial stem cells (GS cells) in culture is studied. The GS cells are usually resistant to gene transfer. The structure of the project is very important. The construction of a new type of equipment for the production and concentration of equipment The infection of GS cells was confirmed and the production of GS cells was successful.

项目成果

エピジェネティクスの視点から見た精原幹細胞の分化制御

表观遗传学角度调控精原干细胞分化

• 发表时间: 2012
• 作者: 白川峰征;ルケンヤマンーディヴィジ;神里亮人;中島久仁子;佐藤泰之;ジャファルシャリフ;吉田松生;浦聖恵;古関明彦;大保和之
• 通讯作者: 大保和之

Identification and analysis of an epigenetic switch crucial for the differe ntiation from spermatogonial stem to progenitor cells

鉴定和分析对于精原干细胞分化为祖细胞至关重要的表观遗传开关

• 发表时间: 2014
• 作者: Shirakawa;T.;Tomizawa;S.;Ono;M.;and Ohbo;K.
• 通讯作者: K.

An epigenetic switch is crucial for spermatogonia to exit the undifferentiated state toward a Kit-positive identity

• DOI: 10.1242/dev.094045
• 发表时间: 2013-09
• 期刊: Development
• 影响因子: 4.6
• 作者: Takayuki Shirakawa;Ruken Yaman-Deveci;Shin-ichi Tomizawa;Yoshito Kamizato;K. Nakajima;Hidetoshi Sone

Identification of an epigenetic checkpoint that controls the differentiation from spermatogonial stem cells to progenitor cells

鉴定控制精原干细胞分化为祖细胞的表观遗传检查点

• 发表时间: 2012
• 作者: Shikarawa T;Ruken Y;Kamizato Y;Nakajima K;Sone H;Sato Y;Jafar S;Takada-Horisawa Y;Muto M;Yoshida S;Ura K;Yoshida S;Koseki H;Suda T;Ohbo K
• 通讯作者: Ohbo K

HP1γ links histone methylation marks to meiotic synapsis in mice

• DOI: 10.1242/dev.064444
• 发表时间: 2011-10-01
• 期刊: DEVELOPMENT
• 影响因子: 4.6
• 作者: Takada, Yuki;Naruse, Chie;Koseki, Haruhiko
• 通讯作者: Koseki, Haruhiko