Purification and functional analysis of YhaTU system, a two component K+/H+ antiporter from Bacillus subtilis

枯草芽孢杆菌双组分 K/H 逆向转运蛋白 YhaTU 系统的纯化和功能分析

• 批准号: 23770156
• 负责人: FUJISAWA Makoto
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Toyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23770156/
• 关键词: イオンチャネル; トランスポーター; アンチポーター; チャネル; 部位特異的変異; タンパク質精製; K+/H+アンチポーター; 枯草菌

Bacillus subtilis YhaTU system is a K+/H+ antiporter which consists from two components, the hydrophilic ancillary protein YhaT and the membrane-embedded YhaU. The YhaTU system is not only a unique cation proton antiporter but also an interesting enzyme in respect of the evolution of ion antiporter from ion channel. In In this study, purification of the YhaTU system and cloning the genes which have point mutations at the various points of the genes have been tried.To purify the YhaTU complex, StrepTagII and His6 tags were introduced at N-terminal or C-terminal of the proteins. Fifty six mutations were also introduced into the genes to test the function of each amino acid residues. Now the basis to analyze the detail function of YhaTU has been constructed.

枯草芽孢杆菌YhaTU系统是一种K+/H+逆向转运蛋白，由亲水性辅助蛋白YhaT和膜包埋的YhaU两部分组成。YhaTU系统不仅是一种独特的阳离子质子反向转运体，而且在从离子通道进化为离子反向转运体方面也是一种有趣的酶。在本研究中，尝试了YhaTU系统的纯化和在基因的各个点上具有点突变的基因的克隆。为了纯化YhaTU复合物，在蛋白质的N-末端或C-末端引入StrepTagII和His 6标签。还将56个突变引入基因中以测试每个氨基酸残基的功能。至此，YhaTU细节功能分析的基础已经建立。

项目成果

プルダウンアッセイとブルーネイティブゲル電気泳動法による枯草菌のK+/H+アンチポーターYhaTUシステムの複合体の検出

通过 Pull-down 测定和蓝色非变性凝胶电泳检测枯草芽孢杆菌 K+/H+ 逆向转运蛋白 YhaTU 系统复合物

• 发表时间: 2011
• 作者: 高田浩志;山田康之;木田祐一郎;藤澤 誠
• 通讯作者: 藤澤 誠

Detection of interaction between subunits of a two-component K^+/H^+.

检测双组分 K^ /H^ 的亚基之间的相互作用。

• 发表时间: 2011
• 作者: Toru Ishikawa;Yasuyuki Kato-Yamada;Makoto Fujisawa
• 通讯作者: Makoto Fujisawa

Purification of YhaTU system, a K^+/H^+ a ntiporter from Bacillus subtilis.

YhaTU 系统的纯化，来自枯草芽孢杆菌的 K^ /H^ 反向转运蛋白。

• 发表时间: 2012
• 作者: Kentaro Kato;Yu Tanaami;Makoto Fujisawa
• 通讯作者: Makoto Fujisawa

プルダウンアッセイとブルーネイティブゲル電気泳動法による枯草菌のK^+/H^+アンチポーターYhaTUシステムの複合体の検出

通过pull-down实验和蓝色天然凝胶电泳检测枯草芽孢杆菌K^+/H^+逆向转运蛋白YhaTU系统复合物。

• 发表时间: 2011
• 作者: 青山智英子、杉本博之、安戸博美;山下智子、堀端康博;杉本さやか、佐藤元康;Masayuki Hara,Sachiko Yanagisawa,Hiroshi Sugimoto,Yoshitsugu Shiro,Takashi Ogura;姜 公秀;田邊賢司;Makoto Fujisawa;Takashi Nomura,Sachiko Yanagisawa,Kyoko Shinzawa-Ito,Shinya Yoshikawa,Takashi Ogura;Kida Yuichiro;藤澤誠
• 通讯作者: 藤澤誠

枯草菌K+/H+アンチポーターYhaTUシステムの精製 (Purification of YhaTU system, a K+/H+ antiporter from Bacillus subtilis.)

YhaTU 系统（来自枯草芽孢杆菌的 K+/H+ 逆向转运蛋白）的纯化。

• 发表时间: 2012
• 作者: 加藤健太郎、田名網悠、藤澤誠 (Kentaro Kato;Yu Tanaami;Makoto Fujisawa)
• 通讯作者: Makoto Fujisawa)