酵母の新規イオン輸送体の解析とオルガネラ膜のイオン輸送体測定技術の基盤構築

酵母中新型离子转运蛋白的分析及细胞器膜离子转运蛋白测量技术的构建基础

• 批准号: 23780100
• 负责人: 浜本 晋
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23780100/
• 关键词: イオンチャネル

本研究では、独自に開発した酵母と大腸菌の巨大化法と細胞内小器官パッチクンプ法の併用により、酵母液胞膜に局在する動物TRPチャネルホモログのYVC1チャネル(Ca^<2+>チャネル)の機能解明を行う。TRPチャネルは、哺乳類に存在する痛みや熱などの刺激に応答する陽イオンチャネルとしての機能を担っている。YVC1チャネルはTRPチャネルの原型と考えられており、TRPチャネルの分子メカニズムを解明するための重要な研究対象である。この成果は、生物の種類に関係なく普遍的なイオンチャネルの機能解析法を示すこととなり、疾病や生存維持に関わる動植物輸送体の解明に貢献することを目的としている。(1)TRPチャネルホモログYVC1の機能解析YVC1の1mMCa2+による活性化を確認している。一方、低濃度の10μMCa2+においては弱い活性化を示す。しかし、還元剤の存在下では大きな活性化を示した。さらなる解析のため、S-S結合を形成するシステイン残基への変異導入による機能解析を行った。その結果、C末端領域に存在するシステイン残基をセリン残基に置換したところ、カルシウムによる活性化は確認されたが、還元剤による活性化能は消失した。以上より、C末端領域のシステイン残基が還元剤による活性化に関与していることを明らかにした。(2)巨大化酵母の膜タンパク質の発現システムの構築パッチクランプ実験に用いる巨大化酵母に輸送体タンパク質を効率的に発現させるために、酵母の巨大化操作によって導入した輸送体タンパク質遺伝子の発現が誘導される発現系の構築をめざしている。DNAマイクロアレイ解析による一倍体酵母と巨大化酵母の発現パターンを比較した。その結果、複数の遺伝子において巨大化処理を行った際に特異的に5から6倍の発現量の上昇が確認された。これらの遺伝子を候補遺伝子としてより詳細な発現解析を行う。

This study で は, alone に 発 し た yeast と coliform の gigantism method と intracellular small organ パ ッ チ ク ン の プ method using に よ り fermented, cell membrane に bureau in す る animal TRP チ ャ ネ ル ホ モ ロ グ の YVC1 チ ャ ネ ル (Ca ^ 2 + > < チ ャ ネ ル) line and interpret を う の function. TRP チ ャ ネ ル は, mammals に exist す る pain み や hot な ど の stimulus に 応 answer す る Yang イ オ ン チ ャ ネ ル と し て の function を bear っ て い る. YVC1 チ ャ ネ ル は TRP チ ャ ネ ル と の prototype test え ら れ て お り, TRP チ ャ ネ ル の molecular メ カ ニ ズ ム を interpret す る た め の important な research like で seaborne あ る. は こ の results, types of biological の に masato is な く common な イ オ ン チ ャ ネ ル の function analytical method を shown す こ と と な り, disease や survival maintain に masato わ る animals and plants conveying body の interpret に contribution す る こ と を purpose と し て い る. (1)TRPチャネ る ホモログYVC1 function analysis YVC1 1mm Ca2+による activation を confirmation <s:1> て る る る. One side, low concentration of <s:1> 10μMCa2+にお にお て て <s:1> weak <s:1> activation を を shows す. The で で large な な activation を in the presence of <s:1> reducing agent た shows <s:1> た. Youdaoplaceholder0 analysis of さらなる ため and S-S combination を to form するシステ するシステ <s:1> residues へ the <s:1> variation introduction による function analysis of を rows った. そ の results, C terminal domains exist に す る シ ス テ イ ン residues を セ リ ン residues に replacement し た と こ ろ, カ ル シ ウ ム に よ る activeness は confirm さ れ た が, yuan also tonic に よ る activeness can disappear は し た. Above よ り, C terminal areas の シ ス テ イ ン residues が also yuan tonic に よ る activeness に masato and し て い る こ と を Ming ら か に し た. (2) huge yeast の film タ ン パ ク qualitative の 発 now シ ス テ ム の build パ ッ チ ク ラ ン プ be 験 に with い る gigantism yeast に conveying body タ ン パ ク qualitative を sharper rate に 発 now さ せ る た め に, yeast の huge operating に よ っ て import し た conveying body タ ン パ ク qualitative heritage 伝 son の 発 now が induced さ れ る 発 now is の build を め ざ し て い る. DNA による パタ ロアレ ロアレ による analysis による ploidy yeast と macrosomic yeast <s:1> occurrence パタ <s:1> を を を comparison た た. そ の results, plural の but 伝 に お い 処 principle line を っ て growth た interstate に specific に 5 か ら 6 times の 発 now rising volume の が confirm さ れ た. こ れ ら の heritage 伝 child を alternate but 伝 と し て よ り detailed な 発 line analytical を う now.

项目成果

巨大化酵母パッチクランプ法を用いた酵母陽イオンチャネルYVC1の機能解析

利用巨酵母膜片钳法分析酵母阳离子通道YVC1的功能

• 发表时间: 2011
• 作者: 浜本晋;森泰生;矢部勇;魚住信之
• 通讯作者: 魚住信之

ジャスモン酸配糖体によるアメリカネムノキの就眠運動の誘導

茉莉酸苷诱导睡意运动

• 发表时间: 2011
• 作者: 浜本晋;中村葉子;Axel Mithofer;Erich Kombrink;Wilhelm Boland;魚住信之;上田実
• 通讯作者: 上田実

植物と微生物の駆動力と膜輸送体

植物和微生物的驱动力和膜转运蛋白

• 发表时间: 2012
• 期刊: 化学と生物
• 作者: 浜本晋;七谷圭;佐藤陽子;魚住信之
• 通讯作者: 魚住信之

酵母液胞膜のCa2+透過性イオンチャネルYVC1の活性調節機構と生理的役割

酵母液泡膜Ca2+通透离子通道YVC1的活性调节机制及生理作用

• 发表时间: 2012
• 作者: 浜本晋;森泰生;矢部勇;魚住信之
• 通讯作者: 魚住信之

物質集積と駆動力形成を担う液胞イオンチャネルの解析

负责物质积累和驱动力形成的液泡离子通道分析

• 发表时间: 2012
• 作者: 浜本晋;魚住信之
• 通讯作者: 魚住信之