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機能性ノンコーディングRNAを用いた葉緑体形質転換による核遺伝子制御技術の開発

利用功能性非编码RNA开发叶绿体转化核基因控制技术

基本信息

批准号：
12J00710
负责人：
田中義行
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kyoto Sangyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J00710/
关键词：
緑体形質転換ウイロイドナス科 Solanum

项目摘要

葉緑体形質転換は花粉による遺伝子拡散がないという点で従来の遺伝子組み換えより優れた技術であるが、葉緑体は2重膜に包まれており、葉緑体内で発現したRNAやタンパク質は核遺伝子に影響を及ぼすことができないという問題点がある。本研究では、葉緑体形質転換による核遺伝子の発現制御技術の開発を目的として、葉緑体膜を通過するRNA分子・ウイロイドの利用を検討した。葉緑体形質転換用ベクターpPRV112A'にEggplant latent viroid(ELVd)のcDNA配列を導入し、形質転換用コンストラクトを作成した。コンストラクトをタバコ(Nicotiana tabacum)の葉にパーティクルガンを用いて導入し、ELVd導入タバコを得た。ELVd由来のsmall RNAを検出することによって、葉緑体内から細胞質へELVd分子が移行しているかを検証した。結果、ELVdの分解によるsmall RNAは検出されず、葉緑体から細胞質へのRNAの移行は認められなかった。併せて、ELVdの宿主範囲の調査を行い、ELVdの移行能や増殖能や機能性が発揮される植物種を明らかにした。これまでELVdの感染はナス(S.melongena)でしか報告されていない。ナスおよびその近縁種にin vitro転写で作成したELVd分子を接種した。接種処理から1カ月後の植物体の葉からRNAを抽出し、ノーザンプロットによりELVdの感染の有無を調査した。結果、S.melongena以外にも、S.aethibpicum,S.macrocarpon,S.torvum,S.mammosum,でELVdの感染が認められた。これらのことから、Solanum属のSubgenus Leptostemonumの植物はELVdの宿主になると考えられた。

Chloroplast shape changeはPollenによる伝子拡sanがないというPointで従来の伝子组みchangeえより优れたTechnologyであるが、Chloroplastは2 double filmに包まれており, chloroplast inside で発appears したRNA やタンパク性はThe influence of the nuclear legacy is the problem and the problem is the problem. The purpose of this study is to use RNA molecules to control the transformation of chloroplast morphology and chloroplast membrane through the use of RNA molecules. The chloroplast morphological changes were replaced by the cDNA sequence introduction of ベクターpPRV112A'Eggplant latent viroid (ELVd), and the chloroplast morphological changes were made by コンストラクトを.コンストラクトをタバコ(Nicotiana tabacum)の叶にパーティクルガンを Import with いて, ELVd import タバコを得た. The origin of ELVd is the small RNA that comes out, the cytoplasm in the chloroplast, and the migration of ELVd molecules into the chloroplast. As a result, ELVd decomposes small RNA and removes it, and the chloroplast and cytoplasm transfer RNA and recognizes it. And せて, ELVd の host range 囲の investigation を line い, ELVd の migration ability や propagation ability や functional が発 hwa される plant species を明らかにした.これまでELVdのInfectionはナス(S.melongena)でしかreportされていない. The ELVd molecule has been inoculated in vitro. One month after the inoculation treatment, RNA was extracted from the leaves of the plant and the presence or absence of ELVd infection in the plant was investigated. As a result, infections other than S. melongena, S. aethibpicum, S. macrocarpon, S. torvum, S. mammosum, and ELVd were detected.これらのことから, Solanum genus のSubgenus Leptostemonum のplant はELVd のhost になると卡えられた.