DNA複製と共役した姉妹染色体接着の分子機構の解析

姐妹染色体粘附耦合DNA复制的分子机制分析

• 批准号: 12J01240
• 负责人: 東 寅彦
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J01240/
• 关键词: コヒーシン; 姉妹染色体接着; XEco2; アセチル化; Sororin; 4-pentynoyl-CoA; ツメガエル卵抽出液; Smc3; DNA複製

DNA複製と協調した姉妹染色体接着成立の機構を明らかにするために、ツメガエル卵抽出液を用いてコヒーシンアセチル基転移酵素(CoAT)の機能とその制御を解析してきた。卵抽出液では2種類あるCoATのうちXEco2が主に接着を担っており、XEco2の染色体への結合はDNA複製課程の初期反応である複製前複合体pre-RCの形成と協調していることを前年度までに発見した。一方、XEco2はDNA複製と協調したSororinのリクルートにも必要である。XEco2に依存したSororinの染色体への結合機構の解明を今年度の研究目標とした。XEco2がDNA複製の間においても機能するのかを明確にするために、XEco2をs期特異的に失活させたところ、Sororinの染色体へのリクルートは見られないことが明らかになった。したがって、XEco2の機能はDNA複製の間においてもSororinのリクルートを促していることが初めて示唆された。さらに、XEco2のN末領域にSororinのリクルートに必須な2つの保存motifを発見した。これらmotifの変異体ではコヒーシンサブユニットSmc3のアセチル化に影響がなかったことより、Sororinのリクルート課程においてSmc3以外の基質のアセチル化が関わると予想した。CoATの新たな基質探索のために、ツメガエル卵抽出液とアセチルCoAのanalo9である4-pentynoy-CoAとを用いて、網羅的なアセチル化基質探索系の構築に努めた。その結果、XEco2に依存したSmc3の修飾を特異的な抗体を用いることなく検出することが可能となった。

DNA replication and coordination of chromosome formation mechanism to clarify the use of DNA transfer enzyme (CoAT) function and control Eggs extracted from the two species of CoAT and XEco 2 are mainly responsible for the early stages of DNA replication and the formation of pre-replication complexes. XEco2 is a necessary part of DNA replication. XEco2 is a chromosome binding mechanism for sorin. The purpose of this study is to clarify the binding mechanism of sorin. XEco2 is a gene that can be used for DNA replication. XEco2 is a gene that can be used for DNA replication. XEco2 functions as a catalyst for DNA replication. In addition, XEco2's N end field Sororin's selection must be 2's preservation motif. In addition to the above, we also propose to improve the quality of materials other than Smc3 by improving the quality of materials. CoAT's new matrix exploration and development of a new matrix exploration system based on 4-pentynoy-CoA As a result, it is possible to use antibodies specific for modifications of Smc3 that are dependent on XEco2.