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miRNAを利用して抗ベクター免疫を抑制可能な新規アデノウイルスベクターの開発

开发一种新型腺病毒载体，可利用 miRNA 抑制抗载体免疫

基本信息

批准号：
12J01416
负责人：
清水かほり
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J01416/
关键词：
アデノウイルスベクターマイクロRNA 遺伝子治療肝障害

项目摘要

本研究において、昨年度までに開発したアデノウイルス(Ad)ベクターの中で、従来型Adベクターよりも肝障害性が低いことが示された、E4遺伝子の3'非翻訳領域にmiR-122aの標的配列を挿入したAdベクター(Ad-E4-122aT)の機能評価と肝障害性が低い原因にっいて検討した。Ad-E4-122aTが従来型Adベクターよりも肝障害性が低い原因は、Ad-E4-122aT投与群においてはAdタンパク質に対する細胞障害性T細胞(CTL)の誘導が低いためではないかと考え、Adベクター投与後の脾臓中のヘキソン(Adベクターの主要エピトープ)特異的なCTLの誘導を検討したところ、Ad-E4-122aTをはじめ全てのAdベクター投与群において脾臓中のヘキソン特異的なCTLは誘導されたものの、その値は同程度であった。また、Adベクター投与後の肝臓におけるTリンパ球の誘導についても検討したところ、従来型Adベクター、Ad-E4-122aT投与群ともにTリンパ球の誘導は認められたが、両群の間に有意差な差はなかった。そこで、Ad-E4-122aT投与群においては肝臓でのAd遺伝子の発現が抑制されていたことから、肝細胞におけるAd抗原提示の程度が低くなっているのではないかと考えた。そこで、マウス初代肝細胞に従来型AdベクターまたはAd-E4-122aTを作用させた後、従来型Adベクターを投与したマウスから単離した脾臓中のCTLを用いてCTLアッセイを行った。その結果、Ad-E4-122aT作用群においては、従来型Adベクター作用群よりも細胞傷害性が抑制されていることが示された。以上の結果より、Ad-E4-122aT投与群では、肝細胞でのAd抗原提示の程度が低いことが示唆された。また、獲得免疫非依存的な経路による肝障害についても検討するため、免疫不全マウス(Rag2/IL2rγc欠損マウス)にAdベクターを投与し、血清中ALT・AST値を測定したところ、従来型Adベクターにおいては有意に上昇したことに対し、Ad-E4-122aTではPBS投与群と同様、全く上昇がみられなかった。これらの結果より、Ad-E4-122aTでは獲得免疫依存的及び非依存的な経路による肝障害が抑制されていることが示された。さらに、Ad-E4-122aTは、従来型Adベクターよりも搭載遺伝子を高効率に長期間発現可能であることが示された(論文投稿中)。

This research was conducted in 2016, and last year's research was conducted in 2017. Medium, idiopathic Advertising type, low liver damage, E4 legacy The functional evaluation of the 3' non-translational field of the target alignment of miR-122a and the insertion of Ad-E4-122aT was carried out to determine the cause of low liver damage. Ad-E4-122aT is a low-risk type of Ad-related liver damage, and Ad-E4-122aT is a common cause of liver damage. Administered cytotoxic T cell (CTL) induction is low and the spleen is high after Administer administration.のヘキソン(Adベクターのmain エピトープ) specific なCTL induction を検したところ、Ad-E4-122aT をはじめ全てのAdベクターinvest in the group において spleen in the のヘキソンspecial The なCTL は induces されたものの and その値は to the same extent as であった.また、Adベクターafter-injection の干臓におけるTリンパballのinduced についても検検恗たところ、従来type Adベクター, Ad-E4-122aT investment group ともにT リンパball のinducing は recognized められたが, 両group の间に intentionally difference な difference はなかった.そこで, Ad-E4-122aT investment group においては liver 臓でのAd legacy 伝子の発 appear がされていたことから, liver cells におけるAd antigen prompting degree is low くなっているのではないかとtest えた.そこで, マウスPrimary hepatocyte derived type AdベクターまたはAd-E4-122aTをeffectさせた后、従To type Adベクターをinvestment and したマウスから単出した spleen 蓓中のCTLを用いてCTLアッセイを行った.その results, Ad-E4-122aT action group においては, derived type Ad ベクター action group よりも cell damage が inhibition されていることが Show された. The above results indicate that the Ad-E4-122aT-administered group and the hepatocytes showed low levels of Ad antigen presentation.また, acquisition of immunity-independent な経路によるLiver disorder についても検検するため, immune deficiency マウALT・AST value measurement method, adhesion type Advertising methodし、Ad-E4-122aTではPBS investment group と同様、All くrise がみられなかった. Ad-E4-122aT and Ad-E4-122aT were immune-dependent and immune-independent, and suppressed liver damage. The Ad-E4-122aT, Ad-E4-122aT, and the original Ad-E4-122aT are equipped with a high-efficiency, high-efficiency, high-efficiency, long-term implementation.