慢性腎臓病の病態促進因子である尿毒症物質を標的とした革新的血液浄化法の開発

开发针对尿毒症物质的创新血液净化方法，尿毒症物质是促进慢性肾脏病病理的因素。

• 批准号: 12J05768
• 负责人: 宮本 洋平
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J05768/
• 关键词: 慢性腎臓病; 尿毒症物質; 酸化ストレス; 血液透析

本研究における最終的な達成目標は、タンパク結合性尿毒症物質の効率的除去による革新的な血液浄化方法の開発であり、その実現には、(1)尿毒症物質に対して高い親和力を有するヒト血清アルブミン(HSA)変異体の設計と効率的な作製、(2)(1)で作製したHSA変異体と尿毒症物質との結合性の定量的評価、(3)閉鎖系でのアルブミン透析による尿毒症物質の除去効率の評価(in vitro)、(4)実験動物でのアルブミン透析による尿毒症物質の除去効率の評価(in vivo)、の4つの検討項目を段階的にクリアーする必要がある。本研究の到達目標の第一段階として、尿毒症物質に対して高い親和力を有するHSA変異体の設計と効率的な作製に加え、作製したHSA変異体と尿毒症物質との結合性の定量的評価が挙げられる。これまでの期間において、尿毒症物質3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-fUran propionate(CMPF)を研究材料とし、CMPF-HSA複合体のX線結晶構造に基づき、CMPF結合サイトであるHSAドメインIIを構成している4つのアミノ酸残基に対してランダムに変異を導入することで、様々なドメインII変異体を提示したHSAドメインIIディスプレイファージライブラリーを作成した。その中からCMPFに結合したファージをスクリーニングし、CMPFに高い親和性を有するクローンを得ることができた。さらに、ランダムに複数のクローンを選択し、これらを大腸菌にて発現させた後、この変異体を精製し、限外濾過法によりCMPFに対する結合性を評価したところ、CMPFに対する親和性の増大が観察された。加えて、In vitro透析装置(閉鎖系回路)を用いた検討からも変異体によるCMPFの引き抜き効果を確認することができた。

The ultimate objectives of this study are: (1) to develop an innovative blood purification method for the removal of binding uremic substances with high affinity for uremic substances;(2)(1) to evaluate the quantitative binding of uremic substances with serum albumin (HSA); and (3) Evaluation of the removal efficiency of uremic substances during dialysis in closed system (in vitro);(4) Evaluation of the removal efficiency of uremic substances during dialysis in animals (in vivo); and (5) Evaluation of the removal efficiency of uremic substances at different stages of the study. The first step of this study was to evaluate the binding of uremic substances to HSA heterografts by quantitative design and production methods. During this period, the uremic substance 3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-fUran propionate(CMPF) was developed as a research material, and the X-ray crystal structure of the CMPF-HSA complex was based on the introduction of changes in the amino acid residues of the HSA substrate II, which constitutes the fourth unit of HSA. The HSA version II is presented as a variant of HSA version II. CMPF-related issues are discussed in detail below. For example, if you are interested in a variety of foods, you can choose to eat them. In addition, in vitro dialysis device (closed system loop), the use of different types of discussion, CMPF and lead to the results of the confirmation

项目成果

尿毒症物質パラクレジル硫酸のレドックス特性と腎障害、心血管疾患発症機序解明

阐明尿毒症物质硫酸对甲苯酯的氧化还原特性以及肾脏损伤和心血管疾病的机制

• 发表时间: 2012
• 作者: Yohei Miyamoto;Yasunori Katsumi Mera;Hiroshi Watanabe;Daisuke Kadowaki;Yu Ishima;Victor Tuan Giam Chuang;Keizo Sato;Masaki Otagiri;Toru Maruyama.;チョウルモングリル（朝魯孟格日勒）;宮本 洋平
• 通讯作者: 宮本 洋平