权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

神経再生関連分子の機能解析

神经再生相关分子的功能分析

基本信息

批准号：
12J07370
负责人：
松本早紀子
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

1. Damage-induced neuronal endopeptidase (DINE)のプロテアーゼ活性評価DINEは胎生期運動ニューロンに豊富に発現する膜一回貫通型のメタロプロテアーゼである。DINE欠損マウス(KO)では、横隔神経の軸索分枝異常により神経筋接合部が形成されず生直後死に至る。DINEの基質は同定されておらず、プロテアーゼとして機能するという証拠は未だ得られていない。そこで本研究ではDINE過剰発現マウス(Tg)を用いたDINE KOのレスキュー実験を行った。胎生期運動ニューロン特異的に野生型DINEまたはプロテアーゼ活性部位を欠失させた変異型DINEを発現するDINE Tgを作製し、KOとの交配を行った。その結果、野生型DINE TgはKOの胎生期運動ニューロン軸索分枝異常をレスキューし、生後生存することができた。一方、変異型DINE Tgとの交配では、KOの表現型がレスキューされず、生直後死亡した。以上のことから、DINEが胎生期運動ニューロンでプロテアーゼとして機能していることが明らかになった。2. シュワン細胞を介したDINEの機能メカニズムDINEの機能メカニズムを検討するために、DINE KOの横隔神経を形態学的に詳細に観察したところ、シュワン細胞の形態に異常が認められた。このことから、軸索に存在するDINEが運動ニューロン-シュワン細胞間相互作用を制御している可能性が考えられた。そこで、胎生期におけるシュワン細胞の分化マーカーの発現を比較したところ、KOで一部の分化マーカーの発現が有意に減少していた。また、運動ニューロンとシュワン細胞の共培養を行うと、軸索に沿って並ぶシュワン細胞の数の割合がKOで有意に減少していた。以上の結果から、DINEによって切断された基質が軸索－シュワン細胞間相互作用を制御し、適切な軸索分枝が形成される可能性が示唆された。

1. The Damage - induced neuronal endopeptidase (DINE) のプロテアーゼ activity evaluation 価 DINE は TaiShengQi movement ニューロンに aboundant に発 now する membrane once through type のメタロプロテアーゼである. DINE owe loss マウス (KO) では, across god 経の axon branch anomaly により経 muscle joints が god formed されずに to る life straight after death. DINE はの matrix with fixed されておらず, プロテアーゼとして function するという card 拠は may らだれていない. そこで this study では DINE before turning 発 now マウス (Tg) をいた DINE KO のレスキュー be 験を line った. TaiShengQi movement ニューロン specific に wild-type DINE またはプロテアーゼ active site を owe lost させた - alien DINE を発 now する DINE Tg を as し, KO との mating を line った. Tg その results, wild type DINE は KO の TaiShengQi movement ニューロン axon branch anomaly をレスキューし, postnatal survival することができた. One party, variant DINE Tgと <s:1> mating でで, KO <s:1> phenotype がレスキュがレスキュされず, birth and death <s:1> た. The above のことから, DINE が TaiShengQi movement ニューロンでプロテアーゼとして function していることが Ming らかになった. 2. シュワン cells を interface した DINE の function メカニズム DINE の function メカニズムを beg す検るために, DINE KO の across god 経を morphology に detailed に観 examine したところ, シュワの form abnormal にがン cells to recognize められた. このことから, axon に exist する DINE が movement ニューロン - シュワン interactions between cells を suppression している possibility が exam えられた. そこで, TaiShengQi におけるシュワン cells のマーカーの発を now compare したところ, KO で a の differentiation マーカーの発が intentionally に now reduce していた. また, sports ニューロンとシュワのン cell co-culture を line うと, axon に along って and ぶシュワン cell number のの cut close が KO で intentionally に reduce していた. の above results から, DINE によって cut された matrix が axon - シュワン interactions between cells を royal し, appropriate な mycobacterium axon がされがる possibility in stopping された.