化学物質の生態リスク評価のための新たな無脊椎モデル生物の確立

化学品生态风险评估新无脊椎动物模式生物的建立

• 批准号: 12J09538
• 负责人: 平野 将司
• 金额: $ 2.32万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J09538/
• 关键词: 環境化学物質; 甲殻類; 生態毒性; エクジステロイド

海産甲殻類アミの脱皮ホルモン受容体（EcR）に着目し、EcRを介したシグナル伝達機構を指標として、環境化学物質のリスクを評価する生態毒性試験を確立することを目的とする。本年度は、EcR相互作用タンパク質として昨年度同定したclathrin heavy chain（CHC）について、EcRを介した転写における役割について調べた。CHCの細胞内局在を調べたところ、細胞質のみならず核内にも一部存在することを明らかにした。CHC発現プラスミドを作成後、アミEcR・USP発現プラスミドとともに昆虫細胞内で共発現させ、ルシフェラーゼ活性を測定した。その結果、CHC発現区は非発現区よりも有意に高い活性が得られ、且つCHC発現量に依存した活性の上昇が認められたことから、EcRを介した転写活性を促進させる作用をもつものと考えられた。次にCHCがアミEcRのどのアミノ酸と相互作用しているのか調べるため、部位特異的変異導入により、アミEcRのPhe563およびTrp568をアラニンに変異させたプラスミドを構築し、CHCとの共発現におけるレポーター活性を測定した。変異導入プラスミドを用いたレポーターアッセイの結果、W568Aのルシフェラーゼ活性がWTと比較し、有意に減少していたことから、Trp568がCHCとの相互作用に特に強く関与していることを明らかにした。さらに、哺乳細胞を用いたtwo-hybridアッセイを構築し、昆虫コアクチベータTaimanと同様にCHC発現群でもレポーター活性の上昇がみられたことから、転写活性化の促進および安定化に寄与するものと考えられた。このtwo-hybrid系と初年度構築したin silico系を組み合わせ、医薬品および生活関連物質（PPCPs）をスクリーニングしたところ、一部の医薬品、ビスフェノール化合物にアゴニスト・アンタゴニスト作用が認められた。

Marine crustacean ecru receptor (EcR) is an indicator for the development of ecotoxicity tests for environmental chemicals. This year, EcR interaction is the same as last year, clathrin heavy chain (CHC) is the same as last year. CHC's intracellular structure is regulated by the presence of a part of the cytoplasm and nucleus. After CHC was prepared, ECR·USP was developed and its intracellular co-production and activity were measured. As a result, CHC occurrence region is not found in the region, and CHC occurrence is dependent on the increase of activity, EcR is involved in the promotion of activity. The second is the determination of the activity of CHC in the formation of ECR and Phe563 and Trp568 in the formation of ECR. The results of different kinds of introduction and application of W568A and W568A are as follows: WT and W568A are more active than W568A and W568A. In addition, mammalian cells are constructed with two-hybrid cells, and insects are developed with the same CHC activity. The two-hybrid system is constructed in the early years and is composed of compounds, pharmaceutical products and life-related substances (PPCPs).

项目成果

Homology modeling of the mysid ecdysone receptor and docking simulation with ecdysteroids.

糠虾蜕皮激素受体的同源建模以及与蜕皮类固醇的对接模拟。

• 发表时间: 2012
• 期刊: Interdisciplinary Studies on Environmental Chemistry Vo. 6. Proceeding for International Symposium on Advanced Studies by Young Scientists, on Environmental Pollution and Ecoioxicology
• 作者: Hirano;M.;Ishibashi;H.;Kim;E.Y.;Arizono;K. and Iwata;H.
• 通讯作者: H.

DDTs・ビスフェノール類によるバイカルアザラシ・マウス エストロゲン受容体転写活性化能の評価

评估滴滴涕和双酚激活贝加尔海豹和小鼠雌激素受体转录的能力

• 发表时间: 2014
• 作者: 芳之内結加;清水沙千子;李鎭善;平野将司;阿草哲郎;鈴木賢一;中田晴彦;金恩英;岩田久人
• 通讯作者: 岩田久人

Toxicity of triclosan and triclocarban in mysid crustacea (Americamysis bahia).

三氯生和三氯卡班对糠虾甲壳类动物（Americamysis bahia）的毒性。

• 发表时间: 2012
• 作者: Arizono;K.;Uchida;M.;Hirano;M.;Miura;S.;Yoshidu;R.;et al.
• 通讯作者: et al.

バイカルアザラシ エストロゲン受容体α・β転写活性化能の評価：in vitro ・ in silico法によるリガンド作用機序の解明

贝加尔海豹雌激素受体α/β转录激活能力的评估：使用体外和计算机方法阐明配体作用机制

• 发表时间: 2014
• 作者: 芳之内結加;清水沙千子;李 鎮善;平野将司;阿草哲郎;鈴木賢一;中田晴彦;金 恩英;岩田久人
• 通讯作者: 岩田久人

Quantitative analysis of the interaction of constitutive androstane receptor with chemicals and steroid receptor coactivator 1 using surface Plasmon resonance biosensor systems : A case study of the Baikal seal (Pusa sibirica) and mouse.

使用表面等离子共振生物传感器系统对组成型雄甾烷受体与化学物质和类固醇受体辅激活剂 1 的相互作用进行定量分析：贝加尔海豹（Pusa sibirica）和小鼠的案例研究。

• DOI: 10.1093/toxsci/kfs288
• 发表时间: 2013
• 期刊: Toxicol. Sci.
• 作者: Dau;P.T.;Sakai;H.;Hirano. M.;Ishibashi;H.;Tanaka;Y.;Kameda;K.;Fujino;T.;Kim;E,Y. and Iwata;H.
• 通讯作者: H.