新規非コードＲＮＡによるＲＮＡ干渉制御メカニズムの解明

新型非编码RNA阐明RNA干扰控制机制

基本信息

批准号：
12J10400
负责人：
松浦絵里子
金额：
$ 3.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J10400/
关键词：
miRNA GW182 ショウジョウバエ Dicer-2 siRNA RNAi Ago2 hsp70 ncRNA

项目摘要

平成27年度は主にmiRNAの遺伝子抑制機能において重要な役割を果たすGW182因子の解析について注力したので、その実施状況を報告する。前年度、作出に成功したgw182欠損変異体の解析を行った。gw182欠損変異体は、２齢幼虫で成長が止まり、致死となる。miRNA標的遺伝子の発現変動の確認と致死の原因となる遺伝子の探索のため、RNAシークエンス解析を行った。その結果、コントロールと比較してgw182変異体で2倍以上の発現上昇を示したmRNA群に、特定のmiRNAの標的配列を有するmRNAが濃縮されていることが判明した。したがって、ショウジョウバエ個体内において、GW182は真にmiRNAの機能を担っていることが示唆された。一方、コントロールと比較しgw182変異体で発現が優位に減少している遺伝子群には幼虫の表皮を形成する遺伝子群の多くが含まれていた。このことから、表皮の形成不全がgw182欠損変異体の致死性の一端であると推測された。今後、gw182遺伝子変異体で発現上昇が認められたmiRNAの標的遺伝子と表皮形成に必須の遺伝子群との関係を調べ、GW182の分子機能と表皮形成との関係を解明していく。また、現在、生体内でmiRNAの遺伝子抑制活性を評価する系を構築することを計画しており、その準備段階として、miRNAのレポーター遺伝子系統作出の準備やgw182遺伝子の一部欠損変異体などの作出を行った。

在2015年，我们主要关注GW182因子的分析，该因素在miRNA的基因抑制功能中起着重要作用，因此我们将报告实施状态。上一年，我们分析了成功产生的GW182缺陷突变体。 GW182缺陷突变体是第二龄幼虫，是致命的。进行RNA测序分析以确认miRNA靶基因的表达变异并搜索引起致死性的基因。结果，发现与对照组相比，具有特定miRNA的靶序列的mRNA富含mRNA组，在GW182突变体中表现出2倍。因此，有人建议GW182在果蝇个体中真正发挥miRNA功能。另一方面，与对照组相比，GW182突变体的表达中主要降低的基因组包含许多形成幼虫表皮的基因组。这表明表皮发育不良是GW182缺陷突变体致死性的一部分。将来，我们将研究miRNA的靶基因之间的关系，MiRNA的靶基因在GW182基因突变体中的表达增加，而对表皮形成必不可少的基因组的表达增加，并阐明了GW182分子功能与表皮形成之间的关系。我们目前正在计划建立一个评估MiRNA在体内基因抑制活性的系统，作为初步步骤，我们准备为miRNA创建记者基因谱系，并创建失去GW182基因的突变体。