Quantifizierung von bioaktiven Lipiden des Sphingo- und Glyceropholipidstoffwechsels mittels Tandem-Messenspektrometrie

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Biologisch aktive Lipide aus der Klasse der Sphingo- und Glycerophospholipide sind aufgrund ihrer Funktion als intrazelluläre und extrazelluläre Botenstoffe in die Regulation von zahlreichen Zellprozessen mit pathophysiologischer Relevanz involviert. Der Sphingo- und Glycerophospholipidstoffwechsel besteht aus einem komplexen Netzwerk von Signalmolekülen mit z.T. entgegengesetzten Funktionen. Für eine detaillierte Analyse ist folglich die Erfassung einzelner Komponenten nicht ausreichend, sondern eine simultane Messung möglichst aller relevanter Metabolite erforderlich. Unter Verwendung konventioneller Methoden wären derartige Untersuchungen mit einem sehr hohen Aufwand verbunden. Die Tandem-Massenspektrometrie (MS/MS) als äußerst sensitive und selektive Technologie erlaubt dagegen die simultane Erfassung verschiedener Lipide mit geringem methodischen Aufwand aus einer akzeptablen Probemenge. Im Zentrum des Antrages steht die Erweiterung eines bereits vorhandenen Parameterspektrums auf Sphingosin-l-phosphat, Ceramid-l-phosphat, Sphingosylphosphorylcholin sowie Diacylglycerin, Phosphatidsäure und Lysophosphatidsäure. Ziel ist die Entwicklung quantitativer Verfahren auf Basis der MS/MS, die sich durch hohe Sensitivität, kurze Analysenzeiten sowie die Kopplung mit automatisierten Auswertalgorithmen auszeichnen. Im zweiten Teil des Antrages soll mit Hilfe dieser Methoden der Eintluss pharmakologischer Modulatoren des Lipidstoffwechsels, die bei der Analyse von Signaltransduktionsprozessen Verwendung finden, in verschiedenen Zelltypen detailliert untersucht werden. Zusammenfassend soll die Etablierung von sensitiven Hochdurchsatzmethoden zur Untersuchung von bioaktiven Lipiden eine methodische Basis für die Analyse komplexer lipidbasierter Signalnetzwerke schaffen.