機能性ウイルスを用いたタンパク質間相互作用解析法の開発

使用功能病毒开发蛋白质-蛋白质相互作用分析方法

• 批准号: 14J11590
• 负责人: 明珍 琢也
• 金额: $ 3.16万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J11590/
• 关键词: ヘルペスウイルス; ミトコンドリア; タンパク質; ケミカルバイオロジー

申請者は、遺伝子改変したヒト単純ヘルペスウイルス (HSV) を用いて、細胞内における標的タンパク質と生理的条件下で相互作用するタンパク質を選択的に採取し解析する方法の開発を目指している。HSV固有のタンパク質はHSV増殖時に必ずウイルス粒子内に取り込まれる。この性質を利用しHSV固有タンパク質に標的タンパク質を融合させることで、標的タンパク質との相互作用分子を同時にウイルス内に封入させ、ウイルスを回収・解析することで相互作用するタンパク質を検出するという方法を開発している。本系の開発においては、各テグメントタンパク質の局在を考慮する必要がある。今回は、目的の標的タンパク質が存在する細胞内小器官をミトコンドリアと想定し、ミトコンドリアに存在するテグメントタンパク質を利用することで、本系を開発することとした。ミトコンドリアは分裂と融合を繰り返すことで多様な形態を示しており、これら形態の変化は発生や樹状突起の維持、白血球の遊走、アポトーシスなどに重要であることが知られており、様々な疾患で形態の変化が報告されている。このように生物学的な重要性からミトコンドリアを標的とし、そこに存在するタンパク質の解析を行うことは非常に重要である。ミトコンドリアに局在するウイルスタンパク質を同定するために、APEXという酵素によるラベル化の系の応用を試みた。APEXをミトコンドリアに局在させることで、ミトコンドリア近傍に存在するテグメントタンパク質をラベル化し、同定することを試みた。これにより、現在までに本系を用いて、複数のミトコンドリアに局在するテグメントタンパク質を決定しており、現在それらの詳細な局在を検討している。しかしながら、年度途中での就職が決定したため、本研究は途中ではあるが中断せざるを得なくなった。

Under the condition of the physiology of interacting with each other, the method of analysis and analysis of the selection of the method of interaction under the physiological conditions of HSV and cytosol in vivo, the method of analytical method for the selection of molecular weight is used in this paper. The inherent properties of HSV must be determined when HSV colonization is carried out. The purpose of this study is to make use of the inherent characteristics of the HSV to integrate the interacting molecules and the interacting molecules at the same time. In the same time, the interacting molecules are sealed in the system, and the interaction is analyzed. The department is in charge of the training program, and all the departments are required to do the necessary work. This time, there are many small organs in the cell that you want to decide, and you need to make use of the information that you need to make use of it. There are multiple signs in the shape of the cell, the shape of the cell, the protuberance of the protuberance, the movement of white blood cells, the loss of important cells, the knowledge of the disease, the appearance of the disease, the appearance of the report. The importance of biology is very important because there is something wrong with the analysis of the line. This is the same as that of APEX. the system is used in the same way as that of APEXP. There is a link between the APEX and the local government, which is located in the vicinity of each other. In the current system, the system is in use, the complex number is in the system, and the office is making a decision on the basis of the situation. In the course of the year, the decision was made in the middle of the year, and in this study, there was an interruption in this study.

项目成果

分子内回転による消光を利用した新規近赤外蛍光プローブの開発

利用分子内旋转猝灭开发新型近红外荧光探针

• 发表时间: 2014
• 作者: Takuya Myochin;Kenjiro Hanaoka;Shimpei Iwaki;Tasuku Ueno;Toru Komatsu;Takuya Terai;Tetsuo Nagano;and Yasuteru Urano;明珍琢也
• 通讯作者: 明珍琢也

Development of a Series of Near-Infrared Dark Quenchers Based on Si-rhodamines and Their Application to Fluorescent Probes

• DOI: 10.1021/jacs.5b00246
• 发表时间: 2015-04-15
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
• 影响因子: 15
• 作者: Myochin, Takuya;Hanaoka, Kenjiro;Urano, Yasuteru
• 通讯作者: Urano, Yasuteru