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油脂生産性糸状菌の遺伝子操作技術基盤の構築と分子育種による有用脂肪酸生産への応用

产油丝状真菌基因工程技术基地的建设及其在分子育种生产有用脂肪酸中的应用

基本信息

批准号：
14J01723
负责人：
菊川寛史
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

油脂生産糸状菌Mortierella alpina 1S-4を用いたエイコサペンタエン酸（EPA）など有用脂肪酸の発酵生産法の開発に向けて、本研究では以下の3点に関する研究を行った。【A. 広範に応用可能な遺伝子破壊技術の構築】1年目に構築した遺伝子破壊技術に加え、近縁種も含め種々の宿主において遺伝子破壊が可能な技術の構築を試みた。単純ヘルペスウイルスのもつチミジンキナーゼ（HSVtk）は、5-フルオロ-2’-デオキシウリジン（F2dU）をリン酸化することで毒性物質に変換する。本研究では、M. alpinaにおける致死性を確認し、最適F2dU濃度を決定した。【B. 遺伝子破壊による脂質漏出生産株の作出】M. alpinaにおいて脂質漏出に関与が推測される数遺伝子を特定・破壊し、脂質漏出株の作出を試みた。結果、このうち１種類の遺伝子破壊株において、脂質漏出化が確認された。現在、詳細な漏出生産量の評価及び培養法の確立を進めている。【C. EPA生産にも関与するΔ12不飽和化酵素遺伝子の破壊による希少脂肪酸生産】ミード酸（20：3ω9）は、関節炎の抑制など有用な生理活性効果が期待されているが、自然界には幼児の関節やへその緒などに存在が知られるのみで、蓄積資源は知られていない。M. apinaは、野生株ではミード酸は蓄積しないが、ARAやEPA生合成経路の中間体としてミード酸を経由していることが示唆される。そこで、ミード酸からARAへの変換を担うΔ12不飽和化酵素の遺伝子を破壊することで、ミード酸生産を試みた。結果、Δ12不飽和化酵素遺伝子の破壊株は、ミード酸を総脂肪酸のうち約10%蓄積することを確認した。これにより、EPAなどのω3系脂肪酸とARAなどのω6系脂肪酸を蓄積しない、飽和脂肪酸とミード酸をはじめとするω9系脂肪酸のみで構成される脂肪酸組成を示す株の作製に成功した。

The research on the development of fatty acid fermentation production method by Mortierella alpina 1S-4 was carried out in the following three aspects.【A. 1 year ago, we tried to construct a new technology for genetic analysis, including the construction of a new technology for genetic analysis. Single cell phone (HSVtk), 5-cell phone (F2dU), and other toxic substances In this study, M. Alpina was identified as lethal and the optimum F2dU concentration was determined.【B. The production of lipid leakage from production plants was studied by M. Alpina is involved in lipid leakage and speculation. The number of genes is specific. The number of lipid leakage strains is tested. The results showed that there was no significant difference between the two groups. Now, the detailed evaluation of leakage production and the establishment of culture method are in progress.【C. EPA production is related to the breakdown of Δ12 unsaturated enzyme products, the production of rare fatty acids, the inhibition of arthritis, the physiological activity of useful products, and the expectation of the existence of natural resources in the joints of young children. M. The apina and wild strains are the intermediates in the production of EPA and acid. A. The production of unsaturated enzymes in the production of unsaturated acids. As a result, the accumulation of Δ12-unsaturated enzyme in the plant was confirmed to be about 10%. The fatty acid composition of EPA, omega-3 fatty acids, ARA, omega-6 fatty acids, saturated fatty acids, omega-9 fatty acids, and fatty acid accumulation showed that the plant was successfully produced.