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繊毛／鞭毛内腕ダイニンの規則的周期性を規定する因子の探索

寻找调节纤毛/鞭毛内臂动力蛋白规则周期性的因素

基本信息

批准号：
14J00436
负责人：
山本遼介
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Osaka University (2015)University of Tsukuba (2014)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J00436/
关键词：
繊毛内腕ダイニン pf23 周期性鞭毛クラミドモナス

项目摘要

昨年度に引き続いて、繊毛内腕ダイニンの規則的周期性形成の機構を探るため、クラミドモナスの既知変異株で最も内腕ダイニン欠損が大きいと考えられる変異株(pf23株)の解析を行った。第1に、pf23株での内腕ダイニンの欠損種を半定量的に決定するため、昨年度より引き続き質量分析計を用いたSpectral Counting法により、pf23株繊毛ダイニン存在量を野生型と比較した。現在までの報告とは異なり、pf23株はaからgまで存在する7種のメジャー内腕ダイニン種のうち、ダイニン種aを除く6種のダイニン種が野生型の20%以下にまで減少していることが明らかになった。第2に、pf23株の原因タンパク質であるPF23pの機能ドメインについて解析を行った。PF23pの全長cDNAの配列決定により、PF23pはN末端側にCS domainを、C末端側に5つのTPR motifを持つタンパク質であることが明らかになった。特定の変異株の解析から、PF23pのC末端側の2つのTPR motifはPF23pの機能に必須では無いことが示唆された。第3に、PF23pの細胞質内での相互作用相手を決定するために、HAタグ付きPF23pを発現するpf23株レスキュー株を用いて細胞質の免疫沈降実験を行った。結果として、複数のFAP(Flagellar Associated Protein)やHeat Shock Protein等、興味深い相互作用相手の候補が同定された。第4に、クライオ電子顕微鏡法を用いてpf23株軸糸の3次元再構成を行った。Spectral Counting法を用いて測定された各種ダイニンの繊毛内存在量結果を支持するように、ダイニン種aのdensityだけが再構成像から明確に確認できた。現在、これらの結果を投稿論文として纏めている。

In the past year, the regular periodic formation mechanism of the inner hair of the plant was explored and analyzed. In the first and pf23 strains, the amount of the defective species in the inner part of the plant was determined by semi-quantitative analysis. In the last year, the amount of the defective species in the wild type of the plant was compared with that in the wild type. The current report is different. It is clear that there are only 7 species of Meningitis in the 23 pf-strains, and 6 species of Meningitis except for species a, which are less than 20% of the wild type. The second, PF23 strain of the cause of the quality of the PF23 p function of the analysis of the line PF23p full-length cDNA alignment determination, PF23p N-terminal CS domain, C-terminal 5 TPR motif to maintain the quality of the product The TPR motif on the C-terminal side of PF23p must not be used for PF23p function. 3. The interaction between PF23p and PF23p in the cytoplasm was determined. The immune sedimentation in the cytoplasm of PF23 strain was determined by HA and PF23p. The results showed that FAP(Flagellar Associated Protein), Heat Shock Protein, etc., and the candidates for the deep interaction phase of interest were determined. 4. The electron microscope method is used to reconstruct the 3D structure of the axis of pf23. Spectral Counting method is used to determine the density of various types of hair. The results support the determination of the density of various types of hair. Now, the results of this paper are submitted.