繊毛／鞭毛内腕ダイニンの規則的周期性を規定する因子の探索

寻找调节纤毛/鞭毛内臂动力蛋白规则周期性的因素

• 批准号: 14J00436
• 负责人: 山本 遼介
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Osaka University (2015)University of Tsukuba (2014)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J00436/
• 关键词: 繊毛; 内腕ダイニン; pf23; 周期性; 鞭毛; クラミドモナス

昨年度に引き続いて、繊毛内腕ダイニンの規則的周期性形成の機構を探るため、クラミドモナスの既知変異株で最も内腕ダイニン欠損が大きいと考えられる変異株(pf23株)の解析を行った。第1に、pf23株での内腕ダイニンの欠損種を半定量的に決定するため、昨年度より引き続き質量分析計を用いたSpectral Counting法により、pf23株繊毛ダイニン存在量を野生型と比較した。現在までの報告とは異なり、pf23株はaからgまで存在する7種のメジャー内腕ダイニン種のうち、ダイニン種aを除く6種のダイニン種が野生型の20%以下にまで減少していることが明らかになった。第2に、pf23株の原因タンパク質であるPF23pの機能ドメインについて解析を行った。PF23pの全長cDNAの配列決定により、PF23pはN末端側にCS domainを、C末端側に5つのTPR motifを持つタンパク質であることが明らかになった。特定の変異株の解析から、PF23pのC末端側の2つのTPR motifはPF23pの機能に必須では無いことが示唆された。第3に、PF23pの細胞質内での相互作用相手を決定するために、HAタグ付きPF23pを発現するpf23株レスキュー株を用いて細胞質の免疫沈降実験を行った。結果として、複数のFAP(Flagellar Associated Protein)やHeat Shock Protein等、興味深い相互作用相手の候補が同定された。第4に、クライオ電子顕微鏡法を用いてpf23株軸糸の3次元再構成を行った。Spectral Counting法を用いて測定された各種ダイニンの繊毛内存在量結果を支持するように、ダイニン種aのdensityだけが再構成像から明確に確認できた。現在、これらの結果を投稿論文として纏めている。

​​ Now ま で の report と は different な り, pf23 は a か ら g ま exist で す る seven の メ ジ ャ ー in wrist ダ イ ニ ン kind の う ち, ダ イ ニ ン a を except く 6 species の ダ イ ニ ン kind が wild-type の below 20% に ま で reduce し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. 2 に, pf23 plants の タ ン パ ク qualitative で あ る PF23p の function ド メ イ ン に つ い analytical line を っ て た. PF23p の full-length cDNA の match column decided に よ り, PF23p は N terminal side に CS domain を, C terminal side に 5 つ の TPR motif を hold つ タ ン パ ク qualitative で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. Specific の - different strains の parsing か ら, PF23p の C terminal side の 2 つ の TPR motif は PF23p の function に must で は no い こ と が in stopping さ れ た. The cytoplasm で に, 3 PF23p の の interaction を decide your hand す る た め に, HA タ グ pay き PF23p を 発 now す る pf23 strains レ ス キ ュ ー を strains with い て cytoplasm の immune sink be 験 を line っ た. The results were と て て, complex <s:1> FAP(Flagellar Associated Protein)や, Heat Shock Protein, etc., with deep interest in <s:1> interaction, <s:1> candidates が and された. The 4th に, ラ ラ ラ ラ <s:1> electron 顕 micromirror method を uses <s:1> てpf23 axes to re-form を rows った in three dimensions.​ Now, the results of the を submitted papers are と て て and めて る る る.

项目成果

Chlamydomonas PF23p is essential for cytoplasmic pre-assembly of a subset of ciliary inner arm dyneins.

衣藻 PF23p 对于纤毛内臂动力蛋白子集的细胞质预组装至关重要。

• 发表时间: 2016
• 作者: 山本遼介

The motility mutant pf23 is defective in the DYX1C1 gene and fails to assemble the ciliary inner arm dyneins

运动突变体 pf23 的 DYX1C1 基因有缺陷，无法组装睫状内臂动力蛋白

• 发表时间: 2014
• 作者: Ryosuke Yamamoto;Stephen M. King;〇Winfield S. Sale;Susan K. Dutcher (〇: Presenter)
• 通讯作者: Susan K. Dutcher (〇: Presenter)

Emory university(米国)

埃默里大学（美国）

Paul Scherrer Institute(Switzerland)

保罗谢勒研究所（瑞士）