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リソソームのターンオーバーと数に関する制御機構

溶酶体周转和数量的控制机制

基本信息

批准号：
14J01145
负责人：
大友孝信
金额：
$ 3.16万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、昨年度に引き続きオートファジー関連遺伝子EPG5の機能を、オートファジー経路のどこに働いているのかおよびリソソーム機能に与える影響をセルラインとゲノム編集を用いた方法で評価した。これまでEPG5に変異のあるVici症候群患者皮膚線維芽細胞を用いた解析およびHeLa細胞でsiRNAを用いたEPG5のノックダウン実験を行い、オートファジー機能の低下が観察されていた。しかしエンドサイトーシスの機能は全く正常であった。細胞の懸濁液で評価したリソソーム酵素活性は正常か軽度低下に留まり、リソソームの分解機能に障害を与えるほど（～10%以下）の低下は認めず、数の変化も明らかではなかった。本年度はsiRNAで用いたものと同じHeLa細胞に対してCRISPR/Cas9を用いてEPG5遺伝子を破壊し、オートファジー及びエンドサイトーシスの評価を行った。皮膚線維芽細胞やノックダウンで認められたオートファジーの障害と正常なエンドサイトーシスはノックアウト細胞でも同様の結果を示した。さらに皮膚線維芽細胞やノックダウンにてはっきりしなかったEPG5のオートファジーへの作用点に関しては、オートファゴソームのマーカーであるLC3とリソソームのマーカーであるLamp1の共局在、オートファゴソームとリソソームの融合を酸性度で評価するtfLC3などを用いて、最終的にEPG5はオートファゴソームとリソソームの融合に働いている事を明らかにした。同様の結果は海外のグループからも確認されたが、我々の研究ではエンドサイトーシスが正常である点において未だ意見の相違がある。本研究結果は申請者を（共）筆頭著者として現在論文を投稿中である。

This year, compared with last year, the function of EPG5 was evaluated by the method of editing and editing. This is the case with EPG5, which is different from that of Vici syndrome patients, and the use of siRNA in HeLa cells and in EPG5 cells.しかしエンドサイトーシスの功能は全く正常であった。Cell suspension evaluation: low enzyme activity from normal to normal, low enzyme activity from normal to This year, we used siRNA to target HeLa cells, and we used it to target EPG5 genes. The results of the same procedure for skin line cells are shown in the table below. In the case of the Lamp1 system, the LC3 system is used to evaluate the compatibility of the EPG5 system with the LC3 system, and the EPG5 system is used to evaluate the compatibility of the LC3 system with the LC3 system. The same results were obtained from overseas research and confirmed by the author. The results of this study are as follows: Applicants, Authors, and Authors.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

別冊新領域別症候群シリーズ「神経症候群（第2版）３」ムコリピドーシスII型，III型（チャプターの担当）

分册新区证候系列《神经系统证候（第2版）3》粘脂沉积症II型、III型（负责章节）

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
S. Hosoi;K. Matsuura;K. Ishida;H. Wang;Y. Mizukami;T. Watashige;S. Kasahara;Y. Matsuda;and T. Shibauchi;大友孝信;大友孝信
通讯作者：
大友孝信

ムコリピドーシスII型（I-cell disease）では液性免疫能が特異的に障害されている

II 型粘脂沉积症（I 细胞疾病）中的体液免疫尤其受损。