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構造生物学的手法を用いた新規アフィニティータグシステムの開発

使用结构生物学方法开发新的亲和标签系统

基本信息

批准号：
14J04800
负责人：
藤井勇樹
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

PAタグシステムは、蛋白質の精製や検出に有用な新規アフィニティータグシステムである。本システムは非常に強力であり、和光純薬工業株式会社より既に市販されている。しかし、PAタグシステムにも欠点が存在する。それはPAタグに対する抗体であるNZ-1が内在性のヒトポドプラニンに結合してしまう点である。そのため、本研究では、バイオインフォマティクスの技術を用いて、PAタグとNZ-1の特異性を改良し、ヒトポドプラニンだけでなく自然界に存在する他の蛋白質とも結合しないような第二世代のPAタグシステムの開発を試みた。まずは、抗体とタグの詳細な結合モデルの解析をX線結晶構造解析によって試みた。その結果、NZ-1とPAペプチドの複合体及びNZ-1単独の結晶化に成功した。さらに、それらの結晶から得られた良好なデータセットを基に構造解析を進め、複合体とNZ-1単独の構造を決定した。最終的に、蛋白質構造データバンク（PDB）へ決定した構造を登録した。バイオインフォマティクス技術を用いてのPAタグシステムの改良は、共同研究によって行なった。まずは、使用する計算手法が本研究で使用可能かどうか評価した。その結果、結合に水が関与しない場合は使用可能であることが示唆された。しかし、計算で得られた変異体の組み合わせを評価すると、結合の回復は確認できなかった。さらに、変異を入れたNZ-1が野生型のPAタグと結合してしまうという大きな問題が生じた。そこで、先に野生型のPAタグと結合しないようなNZ-1を計算によって算出した。しかし、変異型のNZ-1と変異型のPAタグの親和性は変異型のNZ-1と野生型のPAタグの親和性よりも低かった。すなわち、今回の計算では親和性の回復は確認できなかった。これまでの研究により、親和性を簡便に評価可能な系を確立することはできた。今後は、新たなアプローチによる計算で、このシステムを改良していくことを試みる必要がある。

PAタグシステムは, protein のrefined や検出に用な新码アフィニティータグシステムである. This システムは is a very powerful であり, and the Wako Junsha Industry Co., Ltd. よりに is a commercially available されている.しかし、PAタグシステムにも无Pointがexistentする.それはPAタグに対するantibodyであるNZ-1が内性のヒトポドプラニンにcombinationしてしまう点である.そのため、This studyでは、バイオインフォマティクスのTechnologyをいて、PAタグとNZ-1のspecificityをimprovementし、ヒトポドプラニンだけでなくNatural existenceするhisのproteinともcombinationしないようなThe second generationのPAタグシステムの开発をtrialみた.まずは, antibody とタグのDetailsなCombined with モデルのanalyticsをX-ray crystal structure analysisによってtestみた. As a result, the crystallization of NZ-1 PA-based complex and NZ-1 monoton was successful.さらに, それらのcrystallizationから得られた好なデータセットをbaseにstructural analysisを enterめ, complexとNZ-1単多のstructuralをdeterminationした. The final structure of the protein structure is registered in the PDB (PDB). The バイオインフォマティクス technology is improved by いてのPAタグシステムの, and jointly researched によって行なった. It is possible to use this calculation method in this study. It can be used in combination with water and water. It can be used in combination with water.しかし、calculate でget られた変variant のgroup み合わせを comment価すると、combine のreply はconfirm できなかった.さらに、変different NZ-1がwild typeのPAタグとcombinationしてしまうという大きなquestionが生じた.そこで, the first wild type のPAタグと combined with しないようなNZ-1をcalculate によって to calculate した.しかし, 変 heterotype のNZ-1 and 変 heterotype のPA タグの affinity は変 heterotype のNZ-1 と wild type のPA タグの compatibility よりも low かった.すなわち、This time's calculation and affinity のreply and confirmation できなかった.これまでの Research により, affinity を Simple に Evaluation 価 Possible な system を Established することはできた. From now on, we will calculate and calculate new ones and improve them in the future.