ＤＪ－１機能解明を目指した小分子リガンドの開発とその応用

小分子配体的开发及其在阐明 DJ-1 功能中的应用

• 批准号: 14J08172
• 负责人: 田代 晋也
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J08172/
• 关键词: DJ-1; 阻害剤; パーキンソン病; スクリーニング; PARK7

本研究の目的はパーキンソン病関連蛋白質DJ-1に対する阻害剤の同定である。目標としてはDJ-1の最重要残基Cys106残基に対して、解離平衡定数100 nM程度で結合し、細胞内でDJ-1活性を阻害する化合物を特定することである。これまでの研究で、DJ-1に対して解離平衡定数100 nMで結合し、試験管内でDJ-1に結合する化合物が得られていた。平成27年度はこれら化合物の細胞内でのDJ-1に対する阻害活性の検証を行った。DJ-1については様々な機能が提案されているが、本研究では、DJ-1のグリオキシラーゼ活性について検証を行った。グリオキシラーゼ活性とは、細胞内の糖代謝に伴う副産物であるグリオキサールの変換活性である。グリオキサールが加齢に伴って生体内で増加する毒物であり、老年病であるパーキンソン病との関連が示されていること、DJ-1のグリオキシラーゼ活性がCys106残基に依存することなどから、本機能がパーキンソン病関連因子としてのDJ-1の機能検証に最適であると考え、本機能について検証を行った。グリオキシラーゼ活性の基質であるグリオキサールは細胞内の種々の蛋白質のリジン残基を非特異に修飾し、カルボキシメチルリジン(CML)に変換することが知られている。細胞内のCML量をウエスタンブロッティングによって定量することで、細胞内のグリオキサール量を定量した。結果、グリオキサールと共にDMSOを加えた場合に比べ、グリオキサールと共に化合物を加えた場合、細胞内のCML量が大幅に増加した。この増加量は化合物のDJ-1への親和性に依存していた。この結果は同定された化合物がDJ-1を細胞内で阻害することを示している。よって、本研究の目標であるDJ-1阻害剤の同定は達成されたといえる。

The aim of this study was to identify the protein DJ-1, which is involved in the pathogenesis of diseases. Objective To identify compounds that inhibit DJ-1 activity in cells by binding to Cys106, the most important residue of DJ-1, and by determining the dissociation equilibrium at 100 nM. In this study, DJ-1 was found to bind to a compound in a tube at a dissociation equilibrium setting of 100 nM. In 2007, the detection of DJ-1 inhibitory activity in cells of these compounds was carried out. DJ-1 is a new type of DJ-1. It is a new type of DJ-1. The activity of glucose metabolism in cells is associated with the activity of glucose metabolism. The function of DJ-1 is dependent on Cys106 residue. The function of DJ-1 is to optimize the function of DJ-1. The function of DJ-1 is to optimize the function of DJ-1. A non-specific modification of protein residues in a cellular protein is carried out by a substrate that is active in the cell. The amount of CML in the cell is quantified. Results: The amount of CML in cells increased significantly when DMSO was added. This increase depends on the affinity of the compound to DJ-1. The results showed that DJ-1 could be inhibited by the same compound. The purpose of this study is to achieve the same results as DJ-1.

项目成果

Differential Effects of IFN-β on the Survival and Growth of Human Vascular Smooth Muscle and Endothelial Cells.

• DOI: 10.1089/biores.2014.0052
• 发表时间: 2015
• 期刊: BioResearch open access
• 作者: Sano E;Tashiro S;Tsumoto K;Ueda T
• 通讯作者: Ueda T

The Parkinson’s disease related protein DJ-1 specifically binds to Zn(II)

帕金森病相关蛋白 DJ-1 特异性结合 Zn(II)

• 发表时间: 2014
• 作者: Shinya Tashiro;Jose M. M. Caaveiro;Chun-Xiang Wu;Quyen Q. Hoang; Kouhei Tsumoto
• 通讯作者: Kouhei Tsumoto

Thermodynamic and Structural Characterization of the Specific Binding of Zn(II) to Human Protein DJ-1

Zn(II) 与人蛋白 DJ-1 特异性结合的热力学和结构表征

• DOI: 10.1021/bi500294h
• 发表时间: 2014
• 期刊: Biochemistry
• 影响因子: 2.9
• 作者: Shinya Tashiro;Jose M. M. Caaveiro;Chun-Xiang Wu;Quyen Q. Hoang; Kouhei Tsumoto
• 通讯作者: Kouhei Tsumoto

パーキンソン病関連蛋白質DJ-1 の金属結合特異性に関する物理化学的解析

帕金森病相关蛋白DJ-1金属结合特异性的理化分析

• 发表时间: 2014
• 作者: 田代晋也;Caaveiro Jose;Chun-Xiang Wu;Quyen Hoang;津本浩平
• 通讯作者: 津本浩平