エピゲノムマーキングによるキスペプチン発現制御メカニズムの解明

通过表观基因组标记阐明 Kisspeptin 表达的控制机制

基本信息

批准号：
14J10751
负责人：
後藤哲平
金额：
$ 1.47万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences (2015)Nagoya University (2014)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

視床下部サンプルにおけるエンハンサー特異的なヒストン修飾のクロマチン免疫沈降解析を行い、UCSCゲノムブラウザーへマッピングを行った。その結果、マウスゲノム上に1000-2400カ所程度のエンハンサー特異的ヒストン修飾の豊富な領域があることがわかった。一方、これら領域にはKiss1遺伝子座は含まれていなかった。ARCのKiss1遺伝子エンハンサー候補領域10 kb内を詳しく調べると、ARCサンプルではエンハンサー特異的ヒストン修飾を受け、なおかつAVPVサンプルでは修飾を受けていない領域が存在していた。しかし、マッピングされたシグナルの絶対数が少なく、真のシグナルかどうか判断が困難であった。その原因はサンプルがキスペプチンニューロン以外の細胞を多く含んでいるためであると考えられる。そこで、キスペプチンニューロンに緑色蛍光タンパクを発現するKiss1-GFPマウスの胎児視床下部を初代培養しSV40T-antigenによって不死化を試みた。一度継代後、SV40T-antigenを導入すると緑色蛍光は消失したが、不死化自体には成功した。不死化細胞を単一クローンに分離して、クローン化を行い、複数のKiss1-GFPマウス由来の不死化細胞株を得ることに成功した。CRISPR/Casシステムを所属研究室にて確立し、視床下部不死化細胞においてCRISPRを使ってKiss1遺伝子プロモーター付近にエピジェネィック修飾タンパク質p300を強制発現させると、Kiss1発現が上昇した。よって、キスペプチンの発現制御には少なくともエピジェネティック修飾タンパクp300が関連することが示唆された。

对下丘脑样品中增强子特异性组蛋白修饰的染色质免疫沉淀分析进行了映射到UCSC基因组浏览器。结果表明，小鼠基因组上大约有1000-2400个区域，这些区域富含增强子特异性组蛋白的修饰。另一方面，这些地区不包含Kiss1基因座。对ARC的KISS1基因增强子候选区域的详细检查表明，ARC中有一些具有增强子特异性组蛋白修饰的区域，而在未经修饰的AVPV样品中进行了特异性的组蛋白修饰。但是，映射的信号的绝对数量很少，因此很难确定它是否是真正的信号。这被认为是因为该样品包含除基亲肽神经元以外的许多细胞。因此，在Kisspeptin神经元中表达绿色荧光蛋白的KISS1-GFP小鼠的胎儿下丘脑是培养的，并试图用SV40T-抗原使它们永生。传递后，当引入SV40T抗原时，绿色荧光消失了，但永生本身成功。将永生的细胞分离成单个克隆并克隆，以获得从多个KISS1-GFP小鼠衍生的永生细胞系。 CRISPR/CAS系统是在实验室中建立的，并在下丘脑永生细胞中使用CRISPR在KISS1基因启动子附近的表观遗传改性蛋白p300的强迫表达增加了KISS1的表达。因此，有人提出至少表观遗传修饰的蛋白p300参与控制亲肽素的表达。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

キスペプチンノックアウトマウス由来の卵子および精子の受精能の検討

Kisspeptin 敲除小鼠卵子和精子的受精潜力检查

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
後藤哲平;平林真澄;前多敬一郎;束村博子;上野山賀久
通讯作者：
上野山賀久

Hypothalamic arcuate nuleus-specific enhancer for kisspeptin expression of female mice

雌性小鼠下丘脑弓形核特异性增强子 Kisspeptin 表达

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
Goto T;Tsukamura H;Tomikawa J;Abe H;Fukanuma T;Imamura T;Takase K;Sanbo M;Tomita K;Hirabayashi M;Maeda KI;Uenoyama Y.
通讯作者：
Uenoyama Y.