イヌｉＰＳ細胞を用いた血小板減少症の治療に向けた応用的基盤技術の開発

犬iPS细胞治疗血小板减少症应用基础技术的开发

• 批准号: 14J12063
• 负责人: 西村 俊哉
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J12063/
• 关键词: 胚体外内胚葉; イヌ; 肝細胞; iPS細胞; 単一細胞継代; フィーダーレス

今年度は、昨年度に作製したイヌ人工誘導胚体外内胚葉細胞様株(iXEN細胞様株 )を用い血小板への分化誘導を行うに当たり、その性状をさらに解析した結果、本細胞は骨髄ストロマ細胞であるOP9細胞と共培養することで、肝細胞特異的なマーカーであるアルブミンとCYP3A4遺伝子を発現する肝細胞や、毛細胆管膜マーカーであるMRP2タンパクを発現する胆管上皮細胞に分化することを見出した。これまで、他種動物においてもXEN細胞の肝細胞への分化能については報告がなく、本知見はXEN細胞の新たな可能性を提示するものである。また、本細胞株を間葉系幹細胞(MSC)培地にて分化誘導したところ、脊髄損傷や自己免疫疾患の治療に応用されるMSCと同様の表面抗原を発現するイヌMSC様細胞が得られた。次に、イヌiXEN細胞の臨床応用に向けて、遺伝子組換えの無いイヌiXEN細胞を目指し、細胞質内で遺伝子を複製することができるセンダイウイルスベクター(SeVdp)を用いてイヌiXEN細胞の作製を試みたところ、イヌiXEN細胞様細胞が得られ、本細胞はSeVdpの発現が消失していた。また、本細胞はXEN細胞マーカーを発現し、肝細胞および胆管上皮細胞への分化能を有していたことから、遺伝子組換えの無いイヌiXEN細胞様細胞の作製に成功した。以上のことから、今年度は、イヌiXEN細胞様株が成熟肝細胞および胆管上皮細胞への分化能を有していることを明らかにし、さらに臨床応用に適した遺伝子組換えの無いイヌiXEN細胞様細胞を樹立した。本研究により得られた成果は、これまで培養維持可能な幹細胞が存在しないことにより停滞していた獣医再生医療を飛躍的に進めると考えられ、今後、血小板を含めた他胚葉への分化や、本細胞を用いたヒト疾患モデルの作製など発展が期待される。

This year, when using the artificially induced extradefinitive endoderm cell-like strain (iXEN-like strain) produced last year, we further analyzed the properties of these cells, and found that when co-cultured with OP9 cells, a bone marrow stromal cell, differentiates into hepatocytes that express the albumin and CYP3A4 gene, a marker specific to hepatocytes, and bile duct epithelial表达MRP2蛋白的细胞，这是胆管膜的标记。到目前为止，还没有关于Xen细胞在其他动物中Xen细胞对肝细胞的分化潜力的报道，这一发现为Xen细胞带来了新的可能性。此外，当该细胞系在间充质干细胞（MSC）培养基中分化时，表达表面抗原的狗MSC样细胞类似于治疗脊髓损伤和自身免疫性疾病的细胞。接下来，在犬Ixen细胞的临床应用中，我们尝试使用仙台病毒载体（SEVDP）创建犬Ixen细胞而无需遗传修饰，该细胞可以复制细胞质中的基因，并发现可以产生像细胞这样的犬Ixen细胞，以及该细胞中Sevdp的表达消失。此外，由于该细胞表达XEN细胞标记物，并且具有分化为肝细胞和胆管上皮细胞的能力，因此成功地创建了没有遗传重组的犬Ixen样细胞。基于上述情况，今年，我们透露犬Ixen细胞样菌株具有区分成熟的肝细胞和胆管上皮细胞的能力，并且我们已经建立了适合临床应用的遗传无遗传犬Ixen Ixen细胞样细胞。预计从这项研究中获得的结果将大大推进兽医再生医学，由于缺乏可以培养和维持的干细胞，这已经停滞不前，并且有望在未来发展，例如分化为其他细胞，以及使用这些细胞创建人类疾病模型的其他细菌。

项目成果

イヌiPS細胞のマトリゲル上での培養と間葉系幹細胞への分化誘導

狗 iPS 细胞在 Matrigel 上培养并诱导分化为间充质干细胞

• 发表时间: 2016
• 作者: Unezaki N;Nishimura T;Kanegi R;Wijesekera DP;Sugiura Kikuya;Hatoya S;Kawate N;Tamada H;Imai H and Inaba T.;西村 俊哉
• 通讯作者: 西村 俊哉

イヌiPS細胞の製造方法

犬iPS细胞的制备方法

• 发表时间: 2016

イヌiPS細胞の臨床応用への課題と新規幹細胞の可能性

犬iPS细胞临床应用的挑战和新型干细胞的潜力

• 发表时间: 2017
• 作者: Nishimura T;Hatoya S;Kanegi R;Wijesekera DP;Sanno K;Tanaka E;Sugiura K;Hiromitsu Tamada NK;Imai H;Inaba T.;西村 俊哉
• 通讯作者: 西村 俊哉

イヌ人工誘導胚体外内胚葉様細胞株の作製方法

犬人工诱导胚外内胚层样细胞系的制备方法

• 发表时间: 2016

Canine iPS Cell-Derived Platelets have Applications in Veterinary and Human Medicine

犬 iPS 细胞衍生的血小板在兽医和人类医学中的应用

• 发表时间: 2014
• 作者: Unezaki N;Nishimura T;Kanegi R;Wijesekera DP;Sugiura Kikuya;Hatoya S;Kawate N;Tamada H;Imai H and Inaba T.;西村 俊哉;西村 俊哉;西村 俊哉
• 通讯作者: 西村 俊哉