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計画的ネクローシスにより誘導される生体応答機構の解明

阐明计划性坏死引起的生物反应机制

基本信息

批准号：
14J12413
负责人：
進藤綾大
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

CFLARs Tgマウスの腸管ではアポトーシスやネクロプトーシスが亢進している他、本細胞死はRIPK3の欠損によってレスキューされる。しかしながら、両細胞死が独立して誘導されているかは不明であった。Tg;Mlkl-/-マウスにおける活性型カスパーゼ3(CC3)抗体による免疫染色を行ったところMlklの欠損によりCC3陽性シグナルが減弱した。このことからネクロプトーシスがまず誘導され、その後アポトーシスが誘導されると考えられる。また胎生期には発現していないReg3bと呼ばれるタンパク質の増加が認められ、Reg3bは死細胞ではなく生細胞からのシグナルを受けた杯細胞が産生することが判明している。Il22 KOマウスおよび Rorc KOマウスを用いた解析から、成獣小腸においてReg3βの産生はtype 3 innate lymphoid cell(ILC3)から産生されIL-22に依存することが判明した。胎生18.5日目のCFLARs Tg;Rorcgfp/gfpマウスにおいてもIl22およびReg3bの発現の消失が認められた。続いてαGFP抗体およびαReg3β抗体を用いた二重染色の結果、CFLARs Tg;Rorcgfp/+マウスでのみReg3β陽性細胞の周囲にGFP陽性細胞の集簇が認められることが判明した。このことから細胞死の亢進に伴い、産生ないしは分泌される因子がRORγt陽性細胞のリクルートを誘導していることが示唆される。以上から、CFLARs TgマウスのReg3β産生はRORγt陽性ILC3に依存すると考えられる。Reg3βの機能を解析するためにCrispr/Cas9法を用いReg3b KOマウスを樹立した。Reg3b KOマウスとCFLARs Tgマウスとの交配を試みたところ、CFLARs Tgマウスの表現型はレスキューされなかった。

CFLARs Tg and gut cells are activated by IPK3, and the cells are damaged by IPK3. The cell death was induced independently. Tg;Mlkl-/- This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with someone else. Reg 3b is the first cell to be identified in the fetal period. The production of IL-22-dependent Reg3β in the small intestine was identified by using IL-22 KO as a mediator and by using IL-22 KO as a mediator. CFLARs Tg;Rorcgfp/gfp The results of double staining with αGFP antibody and αReg3β antibody showed that CFLARs Tg;Rorcgfp/+ were detected in clusters of GFP positive cells. The expression of RORγ t-positive cells was induced by the production of RORγ t-positive cells. CFLARs Tg and Reg3β are dependent on RORγt positive ILC3. Reg3β function analysis and application of Crispr/Cas9 method Reg3b KO