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ウミホタルを食べて光る魚－キンメモドキの発光メカニズムの解明－

吃完海萤会发光的鱼 - 阐明黄花的发光机制 -

基本信息

批准号：
15J00296
负责人：
別所学
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J00296/
关键词：
生物発光ルシフェラーゼウミホタルキンメモドキ発光生物

项目摘要

キンメモドキから発光活性を指標にルシフェラーゼを精製し、単離した。RNAseqとMS/MSにより、タンパク質の全長配列を決定し、同定した。その後、リコンビナントルシフェラーゼを抗原とし、抗体を作成し、天然型のルシフェラーゼを結合したカラムを用いて、アフィニティー精製を行なった。その結果、質の高い抗ルシフェラーゼ抗体が得られた。また、キンメモドキの新たな供給経路を確立した。本年度は、これらの材料を元に、ウェスタンブロットと免疫組織化学により、キンメモドキにおける同定したルシフェラーゼの局在が発光器官にのみあることを確認できた。現在、組織の微細構造を確認中であり、並行して論文化を進めている。また、発光の進化を議論するために、同じくウミホタルルシフェリンを基質とする発光魚についてもサンプルを集めている。本年度は、スズキ目であるが異なる科のツマグロイシモチ、ガマアンコウ目のイサリビガマアンコウを入手できた。ツマグロイシモチは高知で採取され、また、イサリビガマアンコウはアメリカ合衆国のカリフォルニアで採取された。ツマグロイシモチの系統分類的位置付けは、まだはっきりしていないので、発光の進化を議論する上で、今後、分類学者との共同研究が必要になる。これらの材料に対して、現在、キンメモドキのルシフェラーゼと相同性があるかを調べるため、同様に、ウェスタンブロットと免疫組織化学による検出を進めている。今後、反応が出た場合、プルダウンからのMS/MS解析により、タンパク質の同定を進め、配列から、進化的な考察を深めたい。

The light emitting activity index is refined and separated. RNAseq and MS/MS are the most important elements in the system. After that, the antigen and antibody were produced, and the natural type of antibody was used. The results of the study showed that the quality of the anti-tumor antibody was high. The new supply path for the new equipment is established. This year's study confirmed that the tumor cells were isolated from the tissues of the tumor cells. Now, the fine structure of the organization is confirmed, and the culture is discussed in parallel. The evolution of light is discussed in detail. This year, the number of people in the world who are interested in this topic is increasing.ツマグロイシモチは高知で采取され、また、イサリビガマアンコウはアメリカ合众国のカリフォルニアで采取された。The position of the systematic classification of The material of this article is related to the identification, identification and immunohistochemistry of the same species. In the future, when the problem arises, the MS/MS analysis is carried out, the quality of the product is determined, the distribution is changed, and the evolution is investigated.