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ｒＲＮＡ転写量および核小体動態変化を介した小胞体ストレス応答の解析

通过 rRNA 转录水平和核仁动力学的变化分析内质网应激反应

基本信息

批准号：
15J00599
负责人：
林優樹
金额：
$ 1.79万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J00599/
关键词：
核小体 Ribosomal RNA Cdk1 Wee1 Perichromosomal region Ki67 リボソームストレス rRNA 分裂期小胞体ストレスリボソームRNA プロセシング

项目摘要

1.昨年度に引き続きNOL11のKD時における分裂期(M期)開始遅延の解析を行なった。NOL11のKD細胞ではM期開始の遅延に加え、rRNA転写量が低下し、核小体が崩壊した。これまでに核小体崩壊は、様々な細胞プロセスに関与することが報告されているため、核小体崩壊がM期開始の遅延を引き起こすことが考えられた。そこで、RNAポリメラーゼIの転写因子であるTIF-IAをKDし、核小体崩壊を引き起こすと、NOL11のKD時と同様にM期の開始の顕著な遅延が見られた。さらに核小体崩壊時のM期開始の遅延は、Wee1キナーゼの異常な蓄積に伴う、M期マスターレギュレーターCdk1の抑制的リン酸化の増加であることを突き止めた。つまり、間期での核小体の維持はCdk1の活性化を通して適宜にM期を開始させると考えられる。2. M期染色体表層には核小体タンパク質が蓄積し、perichromosmoal region (PR)を形成する。PRには核小体タンパク質に加え、Ki67やリボソームRNA (rRNA)も蓄積する。rRNAは間期において核小体タンパク質の足場となるため、申請者はrRNAがPR構造の決定要因になると考えた。TIF-IAをKDすると核小体タンパク質、rRNAのPR局在が低下した。さらにM期染色体にRNase Aを処理すると、核小体タンパク質がPRから解離することを明らかにした。興味深いことに、これらの条件においてKi67のPR局在は変化しなかった。一方、Ki67をKDすると、rRNAはPR上に局在せず、凝集体を形成することを見出した。以上の結果から、PRは少なくとも三つの領域から構築されているのではないかと推測される。これらの研究を論文として執筆し、一方はBiochem. Biophys. Res. Commun.に掲載され、もう一方は、Sci. Adv.にてリバイス中である。

1. When the KD of NOL11 was introduced last year, the mitotic phase (M phase) began to delay and the analysis began. NOL11 KD cells began to delay, rRNA levels decreased, and nucleosomes collapsed. This is the first time that a nuclear body has been destroyed. In addition, the mRNA expression of TIF-IA and KD was detected by PCR, and the DNA expression of NOL11 was detected by PCR. In addition, there is a delay in the beginning of M phase when nucleosomes collapse, an abnormal accumulation of Wee1, and an increase in the inhibition of Cdk1 in M phase. The maintenance of nucleosomes in the middle and lower stages of the cycle is related to the activation of Cdk1. 2. M phase chromosome surface layer is nucleosomal protein accumulation, perichromosomal region (PR) formation. PR is a nucleosome protein, Ki67 and RNA (rRNA) accumulation. RRNA is the key factor for determining the structure of the PR TIF-IA and KD are low in nucleosome quality, rRNA and PR In addition, the RNase A of M chromosome was processed, and the nucleosome was dissociated from PR chromosome. The PR bureau of Ki67 is in the process of changing. One side, Ki67, KD, rRNA, r The above results show that PR is less than three times the field is constructed. The author of this paper is a Biochem. Biophys. Res. Commun. Adv..