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回転拡散を利用したタンパク質反応ダイナミクス測定法の開発とその応用

旋转扩散蛋白质反应动力学测量方法的建立及其应用

基本信息

批准号：
15J02073
负责人：
吉武智之
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)1残基のシステインを導入した６つのLysozyme変異体(K19C, S39C, S46C, N55C, V131C)に対して蛍光色素Setau-425-maleimide(以下Setau)を用いて選択的にラベリングを行ったサンプルに対し、CD測定スペクトル測定及び蛍光異方性解消法による測定を行うことでタンパク質の変性曲線に沿った局所部位の回転緩和速度の挙動を調べた。その結果、CD測定により得られた各変異体の変性曲線にはほとんど違いが見られなかった。一方、局所部位の回転緩和速度の挙動は変異体によって異なることがわかった。この結果はラベリングした局所構造の壊れやすさ、及び壊れた後の構造の動きやすさが局所構造ごとに異なることを反映していると考えられ、各局所構造を平均化した情報からは得られない挙動を捉えている考えられる。しかし、結果に対応する具体的な分子論的な描像は得られておらず、今後ラベリング箇所を増やして測定を行いタンパク質構造のより広範な領域の情報を得る必要がある。(2)蛍光異方性解消法をタンパク質反応ダイナミクス観測に適応するためにはデータ取得に要する時間をできるだけ短くする必要があるため、ストリークカメラを導入し、単一光子計数法による測定からアナログ測定に切り替えることで、データ取得時間を最短4ミリ秒まで短縮した。ストップトフローシステムは所属研究室で開発中のものを用いた。測定デッドタイム計測の結果からミリ秒程度の時間スケールでは、回転緩和速度は溶液混合後の流れの影響をほとんど受けないことがわかった。しかし、本システムには2液の混合比率が不安定、測定セル内の溶液が一回の混合で完全に交換されないという問題があり、現在改良を行っている。上記の問題を解決後、各Lysozyme変異体のリフォールディング反応ダイナミクス計測を行いたいと考えている。

(1) 1-residue Lysozyme variant (K19C, S39C, S46C, N55C, V131C) に対して荍Photopigment Setau-425-maleimide (hereinafter Setau) にラベリングを行ったサンプルに対し, CD measurement, スペクトル measurement and び蛍photoisotropy elimination method, を行うことでThe quality of the material is adjusted along the curve of the curve, and the speed of the local part is adjusted to adjust the speed. The result of the test and the CD measurement were obtained by measuring the characteristic curve of each variant. One side, local parts of the return slow down the speed of the movement of the different body and the different body of the なることがわかった.このRESULTS はラベリングしたbureau's structure の壊れやすさ, and び壊れた后の动きやすさがbureau's structure ごとにdifferentなることをReflect していると考えられ, and the bureaus' structures are averaged, したInformation is obtained, and られないい挙动を取えている考えられる.しかし、Result に対応するConcrete なmolecule theory なcharacterization image は得られておらず、From now on ラベリングThe information of the field of the material structure of the material structure and the scope of the field of measurement are necessary. (2) The method of resolving the anisotropy of the light is the same as that of the original material.ためにはデータGet にRequired するTime をできるだけ Short くするNecessary があるため, ストリークカメラを introduction し, single photon counting method による measurement からアナログMeasurement of cutting time and cutting time is the shortest time of 4 seconds and shortening time.ストップトフローシステムは's research laboratory is open to the public. Measuring the results of the measurement, measuring the time in seconds, and returning the results The relaxation speed and the flow of the solution after mixing are affected by the flow of the solution.しかし、本システムには2-liquid mixing ratio is not stable, and the measurement of the セル内のsolution is one Return to the mixed and complete exchange of the problem of the problem and the improvement of the line now. After the above mentioned problems were solved, each Lysozyme variant was measured and tested again.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Rotational diffusion coefficients and the fluctuation of local structure of proteins along denaturation curve 蛍光異方性解消法を用いたタンパク質の構造変性時における回転拡散係数および局所構造動きに関する研究

旋转扩散系数和蛋白质局部结构沿去饱和曲线的波动利用荧光各向异性抵消法研究蛋白质结构变性过程中的旋转扩散系数和局部结构运动

DOI：
发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tomoyuki Yoshitake;Tsuguyoshi Toyooka;Yusuke Nakasone;Kazunori Zikihara;Satoru Tokutomi;Masahide Terazima;吉武智之
通讯作者：
吉武智之

Macromolecular crowding effect for photoreactions of LOV2 domains of Arabidopsis thaliana phototropin 1

拟南芥趋光素1 LOV2结构域光反应的大分子拥挤效应

DOI：
10.1016/j.molliq.2015.08.030
发表时间：
2016
期刊：
Journal of Molecular Liquids
影响因子：
6
作者：
Tomoyuki Yoshitake;Tsuguyoshi Toyooka;Yusuke Nakasone;Kazunori Zikihara;Satoru Tokutomi;Masahide Terazima
通讯作者：
Masahide Terazima

回転拡散係数に対するタンパク質の二次構造変化の影響

蛋白质二级结构变化对旋转扩散系数的影响