神経分化誘導によって産生されるホスファチジン酸分子種の同定とその機能の解析

神经分化诱导产生的磷脂酸分子种类的鉴定及其功能分析

• 批准号: 15J05821
• 负责人: 水野 悟
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J05821/
• 关键词: 神経分化; ホスファチジン酸; ジアシルグリセロールキナーゼ; 質量分析; α-シヌクレイン; ジアシルグリセロール

平成28年度は研究実施計画に従い、16:0/16:0-ホスファチジン酸 (PA) の下流シグナルの解析を行い、また、前年度に引き続き上流シグナルの解析についても一部実施した。上流シグナルに関して、DGKζの過剰発現は、マウス神経芽腫細胞であるNeuro-2a細胞の神経分化誘導に応答した16:0/16:0-PAの産生を増加させることが分かった。さらに、DGKζの触媒活性が16:0/16:0-PAの産生に影響することを明らかにした。16:0/16:0-PAの下流シグナルを明らかにするために、マウス脳ホモジェネートから16:0/16:0-PA結合蛋白質候補を探索し、16:0/16:0-PA結合蛋白質候補としてα-シヌクレインを同定した。大腸菌発現系を用いて、6×His-α-シヌクレインを精製し、5つのPA分子種 (16:0/16:0-, 16:0/18:1-, 18:1/18:1-, 18:0/18:0-, 18:0/20:4-PA) を用いた結合親和性の評価を行った。その結果、意外にも18:1/18:1-PAが最も強い結合活性を示した。さらに、CDスペクトル解析によるα-シヌクレインの2次構造に対するPA分子種の影響を調べたところ、18:1/18:1-PAはα-ヘリックス性を5％から53%にまで増加させた。次に、α-シヌクレインとPAを含むリポソームとを37℃で14日間インキュベーションし、SDS耐性オリゴマー形成とプロテイナーゼK耐性を評価した。その結果、他のPA分子種と比較して18:1/18:1-PAはSDS耐性オリゴマー形成とプロテイナーゼK耐性を強く促進させた。従って、18:1/18:1-PAはα-シヌクレインと強く結合して異常凝集を引き起こすことが分かった。

Heisei 28 Research and Implementation Plan に従い、16:0/16:0-ホスファチジン acid (PA)の下シグナルのanalytic を行い、また、previous year's に citedき続き上流シグナルのanalytic についても一実士した. Upstream シグナルに关して, DGKζのpass剰発appearは, マウス神経blastoma cells であるNeuro-2a The differentiation of cells is induced by に応respond した16:0/16:0-PA の成を Increase させることが分かった.さらに, DGKζのcatalyst activityが16:0/16:0-PAのproduced and affectedすることを明らかにした. 16:0/16:0-PA's indecent pornographic videos 16:0/16: 0-PA binding protein candidate をExplore, 16:0/16:0-PA binding protein candidate としてα-シヌクレインを同定した. The current coliform strain is made of いて, 6×His-α-シヌクレインを refined し, 5つのPA molecular species (16:0/16:0-, 16:0/18:1-, 18:1/18:1-, 18:0/18:0-, 18:0/20:4-PA) を用いた Combined with the affinity of the evaluation 価を行った.そのResults, unexpected にも18:1/18:1-PA's strongest binding activity shows した.さらに、CDスペクトルANALYSISによるα-シヌクレインの2nd structure に対するPA molecular species and the influence of itべたところ、18:1/18:1-PAはα-ヘリックス性を5%から53%にまでincrease plus させた. Second time, α-シヌクレインとPAを有むリポソームとを37℃で14 daytime roomベーションし, SDS resistance オリゴマーformation とプロテイナーゼK resistance をreview価した.そのResults, other PA molecular species and comparison して18:1/18:1-PAはSDS resistance オリゴマーformation とプロテイナーゼK resistance をstrong く promotion させた.従って, 18:1/18:1-PAはα-シヌクレインと强くcombinationしてabnormal aggregationをinducingきこすことが分かった.

项目成果

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Identification of Phosphatidic Acid Molecular Species Produced during Neuronal Differentiation and Their Synthesis Enzyme

神经元分化过程中产生的磷脂酸分子种类及其合成酶的鉴定

• 发表时间: 2015
• 作者: Satoru Mizuno;Fumio Sakane
• 通讯作者: Fumio Sakane

神経分化時に産生されるホスファチジン酸分子種とその産生酵素の同定

鉴定神经分化过程中产生的磷脂酸分子种类以及产生它们的酶

• 发表时间: 2015
• 作者: Aoki R;Tsuboi T;Okamoto H.;水野悟，坂根郁夫
• 通讯作者: 水野悟，坂根郁夫

神経分化誘導時に産生されるホスファチジン酸分子種の経路同定と機能の解析

神经分化诱导过程中产生的磷脂酸分子种类的途径鉴定和功能分析

• 发表时间: 2016
• 作者: 水野悟;坂根郁夫
• 通讯作者: 坂根郁夫

神経分化誘導時に産生されるジアシルグリセロール及びホスファチジン酸分子種の解析

神经分化诱导过程中产生的二酰甘油和磷脂酸分子种类的分析

• 发表时间: 2016
• 作者: Mitsutaka Ogawa;Shogo Sawaguchi;Pawel Bieniasz-Krzywiec;Hirokazu Yagi;Koichi Kato;Jiro Usukura;Koichi Furukawa;Tetsuya Okajima;水野悟，坂根郁夫
• 通讯作者: 水野悟，坂根郁夫