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ヒストン翻訳後修飾特異的一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）の構築とクロマチン修飾動態の解明

组蛋白翻译后修饰特异性单链抗体（scFv）的构建和染色质修饰动力学的阐明

基本信息

批准号：
15J06807
负责人：
鯨井智也
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、遺伝子の発現制御機構の解明のため、細胞核内におけるヒストン修飾の動態を明らかにするためのプローブの開発研究を行う。これまでに、経時的に変化するヒストン修飾動態をライブイメージングするために、細胞内においてヒストン修飾特異的一本鎖抗体（scFv）を発現させる修飾特異的細胞内抗体プローブ（mintbody）の開発研究が進行している。しかし、細胞内においてscFvを発現させた場合に、多くのscFvが抗原に結合せず機能しないことが明らかになっている。そこで本研究では、生化学的、構造生物学的解析によりscFvが細胞内において機能するために必要な性質を明らかにすることで、さらなるmintbodyをデザインすることを目標としている。これまでに、ヒストンH4の20番目のモノメチル化(H4K20me1)特異的scFvである15F11-scFvをモデルに、細胞におけるscFvの機能とscFvの構造的特徴の相関について解析を行ってきた。その結果、scFvのフレーム形成領域の疎水性の相互作用が重要であり、scFvの構造安定性もしくはフォールディングが重要であることが示唆されていた。そこで、さらなるmintbodyの作製のため、様々なscFvについて構造モデリングソフトェアを用いて立体構造モデルを構築し、変異体を予測した。いくつかのscFvについて構造予測を行った結果、mintbodyとして機能するscFvを取得することに成功した。今後、本知見が様々なmintbody作製のための一助となることが期待され、翻訳後修飾全般に関する研究の発展に貢献できると考えられる。

In this study, the official organs of the government and the government of this study are responsible for the explanation and revision of the dynamics of the animal in the cell nucleus. During this period of time, you will start a study on the intracellular antibody assay (mintbody) for the detection of intracellular antibodies (mintbody) in the laboratory. The combination of DNA and intracellular scFv assay showed that the combination of DNA antigen and multiplex scFv antigen was able to detect the expression of DNA in mice. In this study, scFv analysis, biochemical analysis, and biological analysis were carried out. The necessary mechanism to detect intracellular DNA was to determine whether it was necessary to determine whether or not you would need to know whether or not you would need to know whether or not to use mintbody. This is the first time to analyze the characteristics of the special scFv, 15F11-scFv, and scFv machines that can be used to analyze the performance of the scFv machine. The results show that scFv is very important in the field of water-based interaction, and scFv is important in terms of stability. Make sure that the mintbody is used as a tool, and that the body is made out of a stereo device, and that the body is made into a box, so that it can be made out of three-dimensional data. Because of the results of the scFv operation, the results of the bank operation, and the results of the mintbodybuilding machine can be obtained by using the scFv to achieve success. From now on, I know that mintbody will help you to look forward to the future, and to review the whole research exhibition.