ゼニゴケを用いた新しい相互作用タンパク質探索技術の開発

利用地钱开发新型相互作用蛋白检测技术

• 批准号: 15J09907
• 负责人: 田中(坪山) 祥子 (2016-2018)
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J09907/
• 关键词: ゼニゴケ; タンパク質間相互作用; 形質転換; アグロバクテリウム

本技術で用いる、トゲオキヒオドシエビ由来ルシフェラーゼNanoLucのPCA法であるNanoBitのゼニゴケでの機能を確認するため、ポジティブコントロールのモデル実験としてホモダイマーを形成するMXMTタンパク質、ゼニゴケ由来青色光受容体フォトトロピン(MpPHOT) 相互作用を用いて検証を行った。それぞれのタンパク質とLgBitまたはSmBitが融合するようなコンストラクトを作成し 、形質転換ゼニゴケを作出、発光解析を行ったところ、非常に弱い発光しか検出できなかった。このことから、ルシフェラーゼを用いたPCA法は適さないと考えられ、GFPを用いたPCA法であるBiFC法に切り替えることとした。蛍光タンパク質は植物で有効であるsfGFPを用い、NanoBitの場合と同様に、MXMT、MpPHOTタンパク質を用い、それぞれのタンパク質とNGFPまたはCGFPが融合するようなコンストラクトを作成し 、無性芽を用いたアガートラップ法により同時に二重形質転換した。作出した形質転換ゼニゴケを蛍光顕微鏡で観察したところ、GFP蛍光を持つ細胞を観察できた。そのため、スクリーニングにはsfGFPを用いたBiFC法が有効であると考えられる。ゼニゴケの形質転換法（アガートラップ法）の改良では、形質転換体の選抜に用いる抗生物質の比較を行った。BC3-38株由来無性芽を用いたアガートラップ法では、ハイグロマイシンおよびクロルスルフロンが効率的に選抜可能な抗生物質であることがわかった。また、無性芽を用いたアガートラップ法で有効であった共存培養時のパラフィルムの使用と暗処理を胞子、葉状体切片を材料にしたアガートラップ法に応用させた。胞子を用いた場合、パラフィルムが有効であったが、葉状体切片を用いた場合では、どちらの改良点も適さないことがわかった。

This technology uses the PCA method of NanoLuc to confirm the function of NanoBit, and uses the PCA method to verify the interaction between NanoBit and MXMT. For example, if you want to make a photo, you can make a photo. If you want to make a photo, you can make a photo. This is the first time I've ever seen a girl who's been in a relationship with someone else. SfGFP, NanoBit, MXMT, MpPHOT, NgFP, CGFP, Fusion, Asexual Bud, and Double Form Transformation Make a qualitative change in the light microscope, GFP light and cell detection The BiFC method is used to test and verify the results. The improvement of the BC3 -38 strain is derived from asexual buds and can be used as an antibiotic. For example, the use of dark treatment for spore and thallus sections in the culture of asexual buds and asexual buds In the case of spore use, there is no need to change the position of thallus section.

项目成果

タバコカルスを用いた簡便なアグロバクテリウム法（アガートラップ法）

使用烟草愈伤组织的简单农杆菌法（琼脂陷阱法）

• 发表时间: 2019
• 作者: 坪山 祥子;児玉 豊
• 通讯作者: 児玉 豊

ゼニゴケ無性芽を用いた形質転換法（アガートラップ法）の高効率化

利用苔类无性芽的高效转化方法（琼脂陷阱法）

• 发表时间: 2017
• 作者: 田中（坪山）祥子;野中聡子;江面浩;児玉豊
• 通讯作者: 児玉豊

Highly efficient G-AgarTrap-mediated transformation of the <i>Marchantia polymorpha</i> model strains Tak-1 and Tak-2

G-AgarTrap 介导的地钱模型菌株 Tak-1 和 Tak-2 的高效转化

• DOI: 10.5511/plantbiotechnology.18.0917a
• 发表时间: 2018
• 期刊: Plant Biotechnology
• 影响因子: 1.6
• 作者: Tsuboyama Shoko;Kodama Yutaka
• 通讯作者: Kodama Yutaka

アガートラップ法によるゼニゴケ無性芽形質転換における共存培養条件の最適化

琼脂诱捕法优化地钱无性芽转化共培养条件

• 发表时间: 2018
• 作者: 田中（坪山）祥子;野中聡子;江面浩;児玉豊
• 通讯作者: 児玉豊

Three Types of AgarTrap, Simplified Genetic Transformation Methods, for Marchantia polymorpha

地钱的三种 AgarTrap、简化的遗传转化方法

• 发表时间: 2017
• 作者: 田中（坪山）祥子;野中聡子;江面浩;児玉豊;Shoko Tsuboyama-Tanaka;Shoko Tsuboyama-Tanaka and Yutaka Kodama
• 通讯作者: Shoko Tsuboyama-Tanaka and Yutaka Kodama