Optimierung der Sektretion von rekombinanten Proteinen aus Escherichia coli durch Analyse der Genexpression

通过分析基因表达优化大肠杆菌重组蛋白的分泌

• 批准号: 5443577
• 负责人: Professor Dr.-Ing. Karl Friehs
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Technische Chemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5443577?language=en
• 关键词: Optimierung; der; Sektretion; von; rekombinanten

E. coli ist und bleibt einer der wichtigsten Produzenten für rekombinante Proteine in Wissenschaft und biotechnologischer Industrie. Die Sekretion von Proteinen ins Medium ist in den meisten Fällen von großem Vorteil für deren Aufarbeitung. Da E. coli von Natur aus nur wenige Proteine sekretiert, gibt es verschiedene Ansätze, die Sekretionsfähigkeit von E. coli zu verbessern. Dazu gehören die Nutzbarmachung der beiden Hauptsekretionspfade Sec und TAT sowie die Freisetzung rekombinanter Proteine aus dem Periplasma durch die Expression von Bacteriocin Release Proteinen (BRP). Dies beinhaltet sehr komplexe Abläufe. Es ist daher sinnvoll, mittels grundlegender Genexpressionsanalysen ein besseres Bild der Zusammenhänge im Sekretionsgeschehen zu bekommen. Ziel ist es, basierend auf diesen Kenntnissen, die Produktion von rekombinanten Proteinen durch verbesserte Sekretion zu optimieren und die Produktivität zu erhöhen. Im ersten Projektabschnitt soll durch kontrollierte reproduzierbare Anzucht von E. coli Stämmen im Bioreaktor auf definierten Medien die Genexpression des plasmidfreien Wirtsstammes und plasmidhaltiger Stämme (Zielprotein, BRP) mittels high density und low density DNA-Chips untereinander verglichen werden. Die erhaltenen Daten dienen zur Konstruktion einer zweiten Serie sektretionsspezifischer low density DNA-Chips, mit denen in Fermentationen kinetische Untersuchungen zur Genexpression durchgeführt werden sollen. Die Sekretion mittels des Sec- bzw. TAT-Pfades soll parallel untersucht werden.

E.大肠杆菌是一种在科学和生物技术工业中用于重组蛋白质的重要产品。Die Sekretion von Proteinen in Medium ist in den meisten Fällen von großem Vorteil für deren Aufarbeitung。达·E coli von Natur aus努尔wenige Protein sekretiert，gibt es versatiedene Ansätze，die Sekretionsfähigkeit von E. [咒语]通过表达细菌素释放蛋白（BRP），可以从周原体中获得重组蛋白。他们很复杂。这是一个很大的问题，我们对性别表达进行了分析，这是一个在性别关系中最好的图片。因此，基于这种认识，通过最优化的选择和更高的生产率来生产重组蛋白质。第一个项目是通过E.利用高密度和低密度DNA芯片技术，在生物反应器中确定了质粒游离核酸和质粒半抗原（Zielprotein，BRP）的表达培养基。这些数据可以用于构建一个两个系列的低密度DNA芯片，其中包括通过韦尔登进行基因表达的动力学研究。第二部分是隔离区. TAT-Pfades soll parallel untersucht韦尔登.