酵母を用いた膜脂質の合成と細胞内輸送に関する研究

1. 酵母オキシステロール結合タンパク質の機能の解析細胞内のステロール輸送を担うタンパク質の候補として、オキシステロール結合タンパク質(OSBP)ホモログが挙げられる。酵母はオキシステロール結合タンパク質ホモログを7種(OSH1-7)有する。小胞体(ER)からミトコンドリアへのステロール輸送におけるOshタンパク質の役割を調べるため、OSH遺伝子の欠損株からER画分とステロールアシル化酵素を局在させたミトコンドリア画分を調製し、in vitroのステロール輸送解析系を構築した。このステロール輸送解析系に精製したOsh4～Osh7タンパク質、またはOsh1～Osh3を単独で発現する株の細胞質画分を添加したところ、ERで合成されたステロールのミトコンドリアでのエステル化が促進された。また、OSH遺伝子の欠損株ではミトコンドリアのステロール量が低下することが明らかになった。これらの結果から、Oshタンパク質がERからミトコンドリアへのステロール輸送を担うこと、酵母の全てOshタンパク質がステロールを輸送ことができることが示唆された。2. 膜コンタクトサイトの機能の解析ミトコンドリアの一部は様々なオルガネラと近接し、膜コンタクトサイトを形成する。ERMES複合体はERとミトコンドリアのコンタクトサイト形成に関わる。これまでに構築したMito-SatA-EGFPの系を用い、ERMES複合体がERからミトコンドリアへのステロール輸送に関わるかを調べた。その結果、ERMES複合体構成タンパク質遺伝子の破壊株では、野生型株と比較してERで合成されたステロールのミトコンドリアでのエステル化が遅れることが明らかになった。これらの結果から、ERMES複合体がERからミトコンドリアへのステロール輸送に関わる可能生が示唆された。

1. 酵母オキシステロール結合タンパク質の機能の解析細胞内のステロール輸送を担うタンパク質の候補として、オキシステロール結合タンパク質(OSBP)ホモログが挙げられる。酵母はオキシステロール結合タンパク質ホモログを7種(OSH1-7)有する。小胞体(ER)からミトコンドリアへのステロール輸送におけるOshタンパク質の役割を調べるため、OSH遺伝子の欠損株からER画分とステロールアシル化酵素を局在させたミトコンドリア画分を調製し、in vitroのステロール輸送解析系を構築した。このステロール輸送解析系に精製したOsh4～Osh7タンパク質、またはOsh1～Osh3を単独で発現する株の細胞質画分を添加したところ、ERで合成されたステロールのミトコンドリアでのエステル化が促進された。また、OSH遺伝子の欠損株ではミトコンドリアのステロール量が低下することが明らかになった。これらの結果から、Oshタンパク質がERからミトコンドリアへのステロール輸送を担うこと、酵母の全てOshタンパク質がステロールを輸送ことができることが示唆された。2. 膜コンタクトサイトの機能の解析ミトコンドリアの一部は様々なオルガネラと近接し、膜コンタクトサイトを形成する。ERMES複合体はERとミトコンドリアのコンタクトサイト形成に関わる。これまでに構築したMito-SatA-EGFPの系を用い、ERMES複合体がERからミトコンドリアへのステロール輸送に関わるかを調べた。その結果、ERMES複合体構成タンパク質遺伝子の破壊株では、野生型株と比較してERで合成されたステロールのミトコンドリアでのエステル化が遅れることが明らかになった。これらの結果から、ERMES複合体がERからミトコンドリアへのステロール輸送に関わる可能生が示唆された。