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酵母を用いた膜脂質の合成と細胞内輸送に関する研究

利用酵母进行膜脂合成和细胞内运输的研究

基本信息

批准号：
16J00457
负责人：
田スチ
金额：
$ 0.83万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J00457/
关键词：
酵母ステロール輸送

项目摘要

1. 酵母オキシステロール結合タンパク質の機能の解析細胞内のステロール輸送を担うタンパク質の候補として、オキシステロール結合タンパク質(OSBP)ホモログが挙げられる。酵母はオキシステロール結合タンパク質ホモログを7種(OSH1-7)有する。小胞体(ER)からミトコンドリアへのステロール輸送におけるOshタンパク質の役割を調べるため、OSH遺伝子の欠損株からER画分とステロールアシル化酵素を局在させたミトコンドリア画分を調製し、in vitroのステロール輸送解析系を構築した。このステロール輸送解析系に精製したOsh4～Osh7タンパク質、またはOsh1～Osh3を単独で発現する株の細胞質画分を添加したところ、ERで合成されたステロールのミトコンドリアでのエステル化が促進された。また、OSH遺伝子の欠損株ではミトコンドリアのステロール量が低下することが明らかになった。これらの結果から、Oshタンパク質がERからミトコンドリアへのステロール輸送を担うこと、酵母の全てOshタンパク質がステロールを輸送ことができることが示唆された。2. 膜コンタクトサイトの機能の解析ミトコンドリアの一部は様々なオルガネラと近接し、膜コンタクトサイトを形成する。ERMES複合体はERとミトコンドリアのコンタクトサイト形成に関わる。これまでに構築したMito-SatA-EGFPの系を用い、ERMES複合体がERからミトコンドリアへのステロール輸送に関わるかを調べた。その結果、ERMES複合体構成タンパク質遺伝子の破壊株では、野生型株と比較してERで合成されたステロールのミトコンドリアでのエステル化が遅れることが明らかになった。これらの結果から、ERMES複合体がERからミトコンドリアへのステロール輸送に関わる可能生が示唆された。

1. Analysis of the function of yeast オキシステロール combined with タンパクquality and のステロール transportation を恆タンパCandidate of ク之のとして, オキシステロール Combined with タンパクquality (OSBP) ホモログがげられる. There are 7 types of yeast はオキシステロール combined with タンパクquality ホモログを (OSH1-7). O SH 伝子のlossstrainからERdraw分とステロールアシル化zymeをBureau in させたミトコンドリアdraw分をmodulationし, in The in vitro transmission analysis system is constructed.このステロールTransportation analysis system したOsh4～Osh7 タンパクquality, またはOsh1～Osh3を単单で発成すThe strain's cytoplasmic fractionation and addition, ER synthesis and synthesisテロールのミトコンドリアでのエステル化がpromoteされた.また、OSH 伝子の无码组ではミトコンドリアのステロールquantity が下注することが明らかになった.これらのRESULTSから、OshタンパクqualityがERからミトコンドリアへのステロールTransporterうこと, yeast の全てOshタンパクquality がステロールをtransport ことができることがshows 唆された. 2. Analysis of the functions of the membrane film 々なオルガネラと Close contact, membrane コンタクトサイトをforming する. The ERMES complex is formed by the ER ミトコンドリアのコンタクトサイト.これまでにconstructs the Mito-SatA-EGFP system, ERMES ComplexがERからミトコンドリアへのステロールTransportationに关わるかを动べた.そのResults, ERMES complex composition, タンパク性伝子の波壊 strain では, wild-type strain と comparison してER It is a synthesized synthetic material.これらのRESULTSから、ERMES complexがERからミトコンドリアへのステロールTransportationに关わるmay give birth to が说唆された.