Establishment of transgenic methods for functional analysis on cathepsin of Fasciola

片形吸虫组织蛋白酶转基因功能分析方法的建立

• 批准号: 16J02164
• 负责人: 林 慶
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J02164/
• 关键词: Fasciola属; 肝蛭; 体内移行; 形質転換

本研究は第１にFasciola 属において遺伝子組換え技術を確立すること、第２に確立した遺伝子組換え技術を用い、カテプシン等の病原性分子の機能解析を行うことを目的とした。まず、ウイルスベクターを用いた遺伝子導入法の検討を行った。レポーターアッセイの結果、レポーター遺伝子の導入は確認できなかった。次に、エレクトロポレーション法を用い、Fasciola sp.の幼虫に対し、蛍光色素で標識をしたレポーター遺伝子のmRNAを曝露した。蛍光顕微鏡を用いて蛍光標識したmRNAを観察したところ、微弱ではあったが、幼虫の体内に蛍光シグナルを確認でき、体内にｍRNAを導入することができたと考えられた。しかしながら、レポーターアッセイの結果、mRNA曝露に伴う発色強度の増加は認められなかったことから、エレクトロポレーションによるmRNAの導入は、その導入効率および翻訳効率が不十分であることが示唆された。次に、dsRNAを用いたカテプシンL1遺伝子の発現抑制を試みた。幼虫にカテプシンL1に対するdsRNAを曝露した結果、カテプシンL1遺伝子の発現抑制は認められなかった。そこで、カテプシンに代わる病原性分子として、タンパク質Aを標的とした。幼虫にタンパク質Aに対するdsRNAを曝露した結果、タンパク質Aの発現抑制が確認された。次に、マウス腸管ループ試験を行い、腸管外へ脱出した幼虫の割合を比較した結果、曝露群と非曝露群の間に差は認められなかった。このことから、タンパク質Aは幼虫の腸管脱出には関与しない可能性が示唆された。次に、マウスを用いた肝臓移行試験を行った結果、曝露群では肝臓における肝蛭遺伝子のコピー数が減少する傾向がみられた。このことからタンパク質Aは肝臓への侵入時または肝実質内の移動時に働くことが示唆された。

This study aims to establish the functional analysis of pathogenic molecules such as Fasciola gene subunit transformation technology and Fasciola gene subunit transformation technology. The method of introducing genes is discussed in detail. The results of the search and the import of the search and the identification of the search results are as follows: In addition, Fasciola sp. larvae are identified by fluorescent pigments and mRNA is exposed. The light microscope detects the light in the body and detects the light in the body As a result, mRNA exposure was accompanied by an increase in the intensity of mRNA expression, and the rate of mRNA introduction was not very high. In addition, the expression of L1 gene was inhibited by the use of dsRNA. The results of larval L1 gene exposure and the inhibition of L1 gene expression are as follows: The pathogenic molecule is identified by the protein A. The results of exposure of larvae to dsRNA to Transcriptin A confirmed the inhibition of Transcriptin A. The results of this experiment were compared between exposed and unexposed groups. The possibility of larval tube prolapse is indicated. The results of the liver migration test showed that the number of liver tumors decreased in the exposed group. The first is the first time that A person has moved inside the body.

项目成果

肝蛭の宿主体内における移行動態の解析

肝吸虫在宿主体内的迁徙动态分析

• 发表时间: 2016
• 作者: 林 慶;岡 希;内藤 郁慶;正谷 達謄;熊谷 貴;村上 賢二;関（市川）まどか
• 通讯作者: 関（市川）まどか