ＲＮＡキャプチャー法を用いた宿主－病原体の同時発現解析による魚類ワクチン開発

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魚類病原性C群レンサ球菌の病原性メカニズムの解明およびワクチン開発を目的として、病変部位におけるC群レンサ球菌の遺伝子発現解析を行った。遺伝子発現解析の結果、C群レンサ球菌が病変部位において複数の病原遺伝子を発現していることが確認された。発現が確認された遺伝子のうち、血清白濁因子 (SOF) をコードする遺伝子に着目した。SOFは他のレンサ球菌において病原因子の１つとして報告されている。遺伝子発現解析に用いた株を親株に、sof遺伝子を破壊したΔSOF株を作製した。次に、ΔSOF株の病原性について検討するため、感染試験を行った。試験区は親株攻撃区、ΔSOF株攻撃区、対照区の3つを用意した。攻撃した翌日から親株攻撃区でのみ顕著な摂餌不良が確認され、死亡も確認された。接種後2週間観察した結果、親株攻撃区では15尾中13尾が死亡したのに対し、ΔSOF株攻撃区、対照区では死亡は確認されなかった。この結果から、SOFがC群レンサ球菌のカンパチに対する病原性に深く関わっている可能性が示唆された。次に、SOFのワクチン抗原としての効果を検討するため、組み換えSOF (rSOF) を作製した。試験魚は1試験区あたり15尾用いた。ワクチンとして、精製したrSOF溶液とアジュバントを混和したものを用いた。ワクチン接種から3週間後に攻撃を行い、その後2週間観察した。試験期間中、対照区では13尾が死亡したのに対し、ワクチン接種区では4尾が死亡した。ワクチン接種区と対照区では累積死亡率に統計学的に有意な差が認められ (P < 0.01) 、PRS値は69.2%であった。ワクチン接種魚および対照区の魚から得た血清を用いてELISAを行ったところ、ワクチン接種魚血清のrSOFに対する抗体価の上昇が確認された。以上の結果から、rSOFはC群レンサ球菌症に対するワクチン抗原として有効である可能性が示唆された。