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ＲＮＡキャプチャー法を用いた宿主－病原体の同時発現解析による魚類ワクチン開発

使用 RNA 捕获方法通过宿主-病原体共表达分析开发鱼疫苗

基本信息

批准号：
16J03115
负责人：
西木一生
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Fisheries Research and Education Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J03115/
关键词：
C群レンサ球菌ワクチンノカルジアブリ RNA-seq GCSD

项目摘要

魚類病原性C群レンサ球菌の病原性メカニズムの解明およびワクチン開発を目的として、病変部位におけるC群レンサ球菌の遺伝子発現解析を行った。遺伝子発現解析の結果、C群レンサ球菌が病変部位において複数の病原遺伝子を発現していることが確認された。発現が確認された遺伝子のうち、血清白濁因子 (SOF) をコードする遺伝子に着目した。SOFは他のレンサ球菌において病原因子の１つとして報告されている。遺伝子発現解析に用いた株を親株に、sof遺伝子を破壊したΔSOF株を作製した。次に、ΔSOF株の病原性について検討するため、感染試験を行った。試験区は親株攻撃区、ΔSOF株攻撃区、対照区の3つを用意した。攻撃した翌日から親株攻撃区でのみ顕著な摂餌不良が確認され、死亡も確認された。接種後2週間観察した結果、親株攻撃区では15尾中13尾が死亡したのに対し、ΔSOF株攻撃区、対照区では死亡は確認されなかった。この結果から、SOFがC群レンサ球菌のカンパチに対する病原性に深く関わっている可能性が示唆された。次に、SOFのワクチン抗原としての効果を検討するため、組み換えSOF (rSOF) を作製した。試験魚は1試験区あたり15尾用いた。ワクチンとして、精製したrSOF溶液とアジュバントを混和したものを用いた。ワクチン接種から3週間後に攻撃を行い、その後2週間観察した。試験期間中、対照区では13尾が死亡したのに対し、ワクチン接種区では4尾が死亡した。ワクチン接種区と対照区では累積死亡率に統計学的に有意な差が認められ (P < 0.01) 、PRS値は69.2%であった。ワクチン接種魚および対照区の魚から得た血清を用いてELISAを行ったところ、ワクチン接種魚血清のrSOFに対する抗体価の上昇が確認された。以上の結果から、rSOFはC群レンサ球菌症に対するワクチン抗原として有効である可能性が示唆された。

Analysis of pathogenicity of fish group C serogroup C serogroup C serog The results of the analysis of the pathogen detection confirmed that multiple pathogenic pathogens were detected in the affected area of Serococcus serogroup C. It was found that the serum turbidity factor (SOF) was detected in the serum of the patients. SOF is reported to be responsible for pathogenic factors in other bacteria. The gene expression analysis was carried out by using the gene expression system. The pathogenicity of SOF strains was investigated and the infection test was conducted. The test area is the attack area of the parent plant, the attack area of the ΔSOF plant, and the three intentions of the illumination area. The next day, the attack area of the parent plant was confirmed. 2 weeks after inoculation, 13 out of 15 parents died in the challenge zone, and 13 out of 15 parents died in the challenge zone. The results showed that SOF was associated with the pathogenicity of serogroup C bacteria. Second, the SOF and the SOF antigen are discussed in detail. The fish is 1. The fish is 1. The solution is refined and mixed. 3 weeks after vaccination, the attack was carried out, and 2 weeks after vaccination, the observation was carried out. During the trial period, 13 deaths occurred in the inoculated area, and 4 deaths occurred in the inoculated area. Statistical significance of cumulative mortality in vaccinated and irradiated areas (P < 0.01) and PRS (P <69.2%) The rise of antibodies in the serum of inoculated fish was confirmed by ELISA. The above results indicate that rSOF is likely to be associated with group C infection.