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ゲノム情報を利用した魚類Ｃ群レンサ球菌の病原因子の探索およびワクチン開発への応用

利用基因组信息寻找鱼类C族链球菌致病因子及其在疫苗开发中的应用

基本信息

批准号：
12J09057
负责人：
西木一生
金额：
$ 1.15万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

西日本のブリ属魚類養殖場において、Lancefield C群のStreptococcus dysgalactiae (GCSD)による疾病が大きな問題となっている。本研究における当該年度の目的は、GCSDの保有する病原因子の探索および同定、更に同定した病原遺伝子をもとに組み換えタンパク質を作製し、リコンビナントワクチンとしての利用を検討することであった。ヒトの代表的な病原細菌であるS. pyogenesなどを含むレンサ球菌には多くの病原因子が存在している。前年度の研究により、GCSDについて他の病原性レンサ球菌と共通の病原遺伝子が見出された。しかしながら、これらの内どのような病原遺伝子がGCSDの魚類に対する病原性に貢献しているか不明である。そこで当該年度では、GCSDのゲノム情報から得た病原候補遺伝子の内、遺伝子の発現・保有率等を考慮して選定したいくつかの病原遺伝子について遺伝子破壊株を作製した。作製した遺伝子破壊株を用いた人為感染試験を行ったところ、血清白濁因子(SOF)破壊株について、顕著な病原性の低下が確認された。また、sof遺伝子破壊株について発現ベクターを用いた相補株を作製し、カンパチ血液を用いた血中増殖能試験を行った。その結果、sof遺伝子破壊株は親株および相補株に比べて増殖能が有意に低かった。以上の結果から、SOFがGCSDの魚類に対する病原性について強く関係していることを明らかにした。次に、病原性に深く関わることが示されたSOFについて大腸菌での異種発現を行い、組み換えタンパクを多量に作製した。組み換えSOFは、アジュバントと混合し、カンパチに腹腔内注射した。免疫2週間後に同等量の組み換えSOFを接種してブースト免疫を行い、ブースト免疫から2週間後に攻撃を行った。攻撃試験の結果、ワクチン接種区では90%以上が生存したが、対照区では約70%が死亡した。以上の結果から、組み換えSOFがワクチンとして有効であることが示唆された。

West Japan fish farm, Lancefield C group Streptococcus dysgalactiae (GCSD) disease caused by large problems The purpose of this research this year is to explore and identify the pathogenic factors retained by GCSD, and to combine and transform the pathogenic genes identified by GCSD, and to discuss the use of remote control networks. A representative of pathogenic bacteria, S. Pyogenes contain a variety of pathogenic factors. In the previous year's research, GCSD found that other pathogenic bacteria and common pathogenic vectors were found Pathogenic genes contribute to the pathogenicity of GCSD fish. In this year, we will consider the candidate pathogen vectors obtained from the GCSD's Genome information, the occurrence and retention rate of the vectors, etc., and select the candidate pathogen vectors of the GCSD's Genome to create the genetic vectors. It is confirmed that human infection test, serum turbidity factor (SOF) test, and low pathogenicity test are used to control the virus. In addition to the above, the author also conducted a series of tests on the development of the virus. The fruit, the seed, the plant, the parent plant, the complementary plant, the seed, the plant, the plant The above results show that SOF has a strong pathogenic relationship with GCSD fish. In addition, pathogenic bacteria are closely related to the development of SOF, and the formation of bacteria is controlled in large quantities. SOF was injected intraperitoneally into the abdomen. 2 weeks after immunization, the same amount of SOF was used to immunize the mice. More than 90% of the infected areas survived and 70% of the infected areas died as a result of the challenge. The above results show that the SOF has been replaced by the SOF.