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ゲノム情報を利用した魚類Ｃ群レンサ球菌の病原因子の探索およびワクチン開発への応用

利用基因组信息寻找鱼类C族链球菌致病因子及其在疫苗开发中的应用

基本信息

批准号：
12J09057
负责人：
西木一生
金额：
$ 1.15万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

西日本のブリ属魚類養殖場において、Lancefield C群のStreptococcus dysgalactiae (GCSD)による疾病が大きな問題となっている。本研究における当該年度の目的は、GCSDの保有する病原因子の探索および同定、更に同定した病原遺伝子をもとに組み換えタンパク質を作製し、リコンビナントワクチンとしての利用を検討することであった。ヒトの代表的な病原細菌であるS. pyogenesなどを含むレンサ球菌には多くの病原因子が存在している。前年度の研究により、GCSDについて他の病原性レンサ球菌と共通の病原遺伝子が見出された。しかしながら、これらの内どのような病原遺伝子がGCSDの魚類に対する病原性に貢献しているか不明である。そこで当該年度では、GCSDのゲノム情報から得た病原候補遺伝子の内、遺伝子の発現・保有率等を考慮して選定したいくつかの病原遺伝子について遺伝子破壊株を作製した。作製した遺伝子破壊株を用いた人為感染試験を行ったところ、血清白濁因子(SOF)破壊株について、顕著な病原性の低下が確認された。また、sof遺伝子破壊株について発現ベクターを用いた相補株を作製し、カンパチ血液を用いた血中増殖能試験を行った。その結果、sof遺伝子破壊株は親株および相補株に比べて増殖能が有意に低かった。以上の結果から、SOFがGCSDの魚類に対する病原性について強く関係していることを明らかにした。次に、病原性に深く関わることが示されたSOFについて大腸菌での異種発現を行い、組み換えタンパクを多量に作製した。組み換えSOFは、アジュバントと混合し、カンパチに腹腔内注射した。免疫2週間後に同等量の組み換えSOFを接種してブースト免疫を行い、ブースト免疫から2週間後に攻撃を行った。攻撃試験の結果、ワクチン接種区では90%以上が生存したが、対照区では約70%が死亡した。以上の結果から、組み換えSOFがワクチンとして有効であることが示唆された。

Western Japanese mackerel is a kind of zooplankton, and Lancefield C group Streptococcus dysgalactiae (GCSD) has serious disease problems. The purpose of this study is to maintain the pathogen of GCSD in this year. In this study, we explored the same and more common etiology in this year. The pathogenic bacteria represented by pathogenic bacteria, S. pyogenes, contain pathogenic bacteria, cocci, multiple pathogens, and pathogens. In the previous year, we studied the pathogens and GCSD tested other pathogens and cocci shared the same pathogens. The etiology of the pathogen, such as the GCSD virus, is unknown. In the current year of the year, GCSD infection has been reported that the etiology of the disease, and the retention rate of the disease, have been selected. The infected strains were detected by artificial infection, serum leukocyte factor (SOF) was detected by Elisa, and pathogenicity was confirmed by pathogenicity. It was found that the strain was broken and the sof strain was broken. It was found that the strain was used as the drug, and the blood was used to express the ability to colonize the blood. The results showed that the reproductive ability of sof spores was intentionally lower than that of other strains. The results of the above results, such as SOF GCSD disease, show that the pathogenicity of the disease is not specific to the disease. Secondary and pathogenic laboratory tests show that there are several kinds of pathogens, such as SOF, bacteria, bacteria, bacteria and bacteria. Tissue tissue was injected intraperitoneally with SOF, intravenous injection, and intravenous injection. After 2 weeks of immunization, the same amount of SOF was used to inoculate the immunization line, and the mice were vaccinated after 2 weeks of immunization. The results of the attack test, more than 90% of the survival rate in the contact area, and about 70% of the death rate in the control area. As a result of the above results, there is an indication of instigation in the organization of SOF information.