Ｃ型肝炎治療のための膜蛋白質ＩＬ２８ＲＡ活性化へテロダイマーペプチド薬剤の開発

本研究では、細胞表面に発現するIL28RAを標的としてこれに結合し活性化する特殊ペプチドの探索を目的としている。C型肝炎といったウイルス性の疾患に対して細胞膜受容体であるIL28RAが担う抗ウイルス活性は非常に有用であると考えられ、IL28RAを活性化する特殊ペプチドはウイルス性疾患の治療薬の開発に役立つことが期待される。前年度までに、結合強度が高い(KDがnMオーダー)IL10R2結合特殊環状ペプチドの獲得に成功した。今年度は細胞セレクションで使用するIL28RA発現細胞の樹立を目指した。細胞セレクションを行う際、IL28RAが発現している細胞のみに対してパニングを行うことがIL28RA特異的に結合する特殊環状ペプチドの回収に非常に重要である。そこで、IL28RA発現細胞を選択的に識別する方法として、GFPによる蛍光基標識を用いた。IL28RAのC末端をGFP付加したようなプラスミドを構築し、これをヒト細胞に遺伝子導入することでIL28RA発現細胞の獲得を目指した。トランスフェクション後の細胞からIL28RAを発現している細胞の選択的回収をセルソーターにより試みたが、発現量が少ない（蛍光強度が小さい）ためにセルソーターによるIL28RA発現細胞の回収の効率が非常に悪かった。そこで発現量の向上のためにプラスミドの最適化、およびIL28RAとeGFPの間のリンカーの種類も検討している。この細胞セレクションと並行して、単離精製されたIL28RA細胞外ドメインに対するスクリーニングも行った。スクリーングの結果、IL28RA結合ペプチドの候補配列を複数獲得に成功した。得られたペプチドと前年度までに得られたIL10R2結合ペプチドを様々な長さのリンカーでつなげることで、IL28RAとIL10R2のダイマー化を誘起し、IL28RA由来の抗ウイルス活性が示すことが期待される。

本研究では、細胞表面に発現するIL28RAを標的としてこれに結合し活性化する特殊ペプチドの探索を目的としている。C型肝炎といったウイルス性の疾患に対して細胞膜受容体であるIL28RAが担う抗ウイルス活性は非常に有用であると考えられ、IL28RAを活性化する特殊ペプチドはウイルス性疾患の治療薬の開発に役立つことが期待される。前年度までに、結合強度が高い(KDがnMオーダー)IL10R2結合特殊環状ペプチドの獲得に成功した。今年度は細胞セレクションで使用するIL28RA発現細胞の樹立を目指した。細胞セレクションを行う際、IL28RAが発現している細胞のみに対してパニングを行うことがIL28RA特異的に結合する特殊環状ペプチドの回収に非常に重要である。そこで、IL28RA発現細胞を選択的に識別する方法として、GFPによる蛍光基標識を用いた。IL28RAのC末端をGFP付加したようなプラスミドを構築し、これをヒト細胞に遺伝子導入することでIL28RA発現細胞の獲得を目指した。トランスフェクション後の細胞からIL28RAを発現している細胞の選択的回収をセルソーターにより試みたが、発現量が少ない（蛍光強度が小さい）ためにセルソーターによるIL28RA発現細胞の回収の効率が非常に悪かった。そこで発現量の向上のためにプラスミドの最適化、およびIL28RAとeGFPの間のリンカーの種類も検討している。この細胞セレクションと並行して、単離精製されたIL28RA細胞外ドメインに対するスクリーニングも行った。スクリーングの結果、IL28RA結合ペプチドの候補配列を複数獲得に成功した。得られたペプチドと前年度までに得られたIL10R2結合ペプチドを様々な長さのリンカーでつなげることで、IL28RAとIL10R2のダイマー化を誘起し、IL28RA由来の抗ウイルス活性が示すことが期待される。