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Ｃ型肝炎治療のための膜蛋白質ＩＬ２８ＲＡ活性化へテロダイマーペプチド薬剤の開発

开发激活膜蛋白IL28RA的异二聚肽药物用于治疗丙型肝炎

基本信息

批准号：
16J04031
负责人：
石田啓
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J04031/
关键词：
IL28RA C型肝炎特殊環状ペプチド特殊ペプチドスクリーニング

项目摘要

本研究では、細胞表面に発現するIL28RAを標的としてこれに結合し活性化する特殊ペプチドの探索を目的としている。C型肝炎といったウイルス性の疾患に対して細胞膜受容体であるIL28RAが担う抗ウイルス活性は非常に有用であると考えられ、IL28RAを活性化する特殊ペプチドはウイルス性疾患の治療薬の開発に役立つことが期待される。前年度までに、結合強度が高い(KDがnMオーダー)IL10R2結合特殊環状ペプチドの獲得に成功した。今年度は細胞セレクションで使用するIL28RA発現細胞の樹立を目指した。細胞セレクションを行う際、IL28RAが発現している細胞のみに対してパニングを行うことがIL28RA特異的に結合する特殊環状ペプチドの回収に非常に重要である。そこで、IL28RA発現細胞を選択的に識別する方法として、GFPによる蛍光基標識を用いた。IL28RAのC末端をGFP付加したようなプラスミドを構築し、これをヒト細胞に遺伝子導入することでIL28RA発現細胞の獲得を目指した。トランスフェクション後の細胞からIL28RAを発現している細胞の選択的回収をセルソーターにより試みたが、発現量が少ない（蛍光強度が小さい）ためにセルソーターによるIL28RA発現細胞の回収の効率が非常に悪かった。そこで発現量の向上のためにプラスミドの最適化、およびIL28RAとeGFPの間のリンカーの種類も検討している。この細胞セレクションと並行して、単離精製されたIL28RA細胞外ドメインに対するスクリーニングも行った。スクリーングの結果、IL28RA結合ペプチドの候補配列を複数獲得に成功した。得られたペプチドと前年度までに得られたIL10R2結合ペプチドを様々な長さのリンカーでつなげることで、IL28RAとIL10R2のダイマー化を誘起し、IL28RA由来の抗ウイルス活性が示すことが期待される。

The purpose of this study is to explore the specific binding and activation of IL-28RA targets on cell surfaces. IL 28RA is very useful for anti-hepatitis C activity in the treatment of hepatitis C, especially in the treatment of hepatitis C. In the previous year, the binding strength was high (KD = nM). IL10R2 was successfully obtained by binding to special ring selection. This year, the use of IL-28RA in cell culture is indicated. It is very important for IL-28RA to be present in the cell cycle, and for IL-28RA to be present in the cell cycle, and for IL-28RA to be present in the cell cycle. Methods for identifying cells selected for detection of IL-28RA and GFP are described. The C-terminal region of IL28 RA was transferred to the cells for construction and gene transfer, and the cells for IL28 RA production were obtained. The recovery rate of IL-28RA in cells detected after irradiation was very low, and the amount of IL-28RA detected was very low (light intensity was low). The optimization, optimization, and classification of IL28RA and eGFP are discussed. The cell culture and purification of IL-28RA in vitro The results of the search, IL28RA combined with the selection of candidate columns were successfully obtained. In the previous year, IL-10R2 was found to bind to IL-28RA and IL-10 R2, and IL-28RA was found to have anti-tumor activity.