ヒト動脈硬化組織検体におけるＣｈｋ２－ｐ５３シグナルの解析

人动脉粥样硬化组织标本中 Chk2-p53 信号的分析

基本信息

批准号：
16J04588
负责人：
藤本真徳
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J04588/
关键词：
p53 IL33 NAFLD LS-MS/MS Chk2リン酸化

项目摘要

癌細胞を用いて、Myc-FLAG-Chk2発現vectorを腫瘍細胞に導入し、Chk2特異的結合分子を同定した。LC-MS/MS解析により新規リン酸化部位を同定した。Chk2キナーゼドメインの中心に、新規リン酸化部位T441/S442を認め、その周囲のリジン残基はユビキチン化されていた。次に、Chk2-516A/518A(非リン酸化)変異体のDNA損傷におけるG1期細胞周期制御への影響をFUCCI systemを用いて検討した。P53をH1299にAdenovirusを用いて導入し、またChk2 wild typeとChk2 516/518A変異体を導入した。すると、G1 phaseにある細胞でp21のmRNA発現が低下することがqPCRで確認された。以上から、Chk2-516/518がDNA損傷におけるG1期細胞周期制御に役割を果たすことが明らかとなった。２．NAFLD/NASH(non-alcoholic fatty liver disease / non-alcoholic steatohepatitis)は近年注目を集めている。肝臓には多数の免疫細胞が常在し、炎症がNAFLD/NASH病態進展に寄与する。IL33を投与したマウスでは空腹時血糖は低下した。pyruvate tolerance testによる糖新生を誘導した際、rIL33投与群では血糖上昇すなわち糖新生が有意に抑制されることが明らかとなった。この現象は、新規免疫細胞ILC2を含む免疫細胞を欠損したNSG mouseでは消失した。次にILC2を肝臓からsortし、ILC2ノックアウトマウスに移植したところ、IL33に対する反応性がrescueされた。この反応はIL13 KOマウスでは消失した。以上から、肝臓ILC2由来のIL13が糖新生抑制による血糖低下を担う可能性が示唆された。（近日論文投稿予定）

癌细胞用于将表达Myc-Flag-CHK2载体引入肿瘤细胞中，以鉴定CHK2特异性结合分子。通过LC-MS/MS分析鉴定出一种新型的磷酸化位点。在CHK2激酶结构域的中心发现了一个新型的磷酸化位点T441/S442，周围赖氨酸残基被泛素化。接下来，使用FUCCI系统研究了CHK2-516A/518A（非磷酸化）突变体对DNA损伤中G1相细胞周期控制的影响。使用腺病毒将p53引入H1299中，并且还引入了CHK2野生型和CHK2 516/518A突变体。 qPCR证实，在G1相位的细胞中，p21的mRNA表达降低。由此，已经揭示了CHK2-516/518在DNA损伤中的G1相细胞周期调节中起作用。 2。NAFLD / NASH（非酒精性脂肪肝病 /非酒精性脂肪性肝炎）近年来引起了人们的关注。肝脏中存在许多免疫细胞，炎症有助于NAFLD/NASH病理的发展。接受IL33的小鼠的空腹血糖减少。当通过丙酮酸耐受性测试诱导糖异生时，发现在用RIL33治疗的组中，血糖升高或糖异生显着抑制。这种现象消失在缺乏免疫细胞的NSG小鼠中，包括新型免疫细胞ILC2。然后将ILC2从肝脏分类并移植到ILC2基因敲除小鼠中，并证明了对IL33的反应性。这种反应消失在IL13 KO小鼠中。这些表明，源自肝脏ILC2的IL13可能是由于糖异生的抑制而降低血糖的原因。（很快就会发布论文）

项目成果

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科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

RNA-seq解析による褐色細胞腫(Pheo)の悪性/転移性規定因子の探索

通过 RNA-seq 分析寻找嗜铬细胞瘤 (Pheo) 的恶性/转移决定因素

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
藤本真徳;滝口朋子;永野秀和;佐久間一基;中山哲俊;田村愛;駒井絵里;志賀明菜;河野貴史;樋口誠一郎;鈴木佐和子;小出尚史;木村伯子;横手幸太郎;田中知明
通讯作者：
田中知明

褐色細胞腫の臨床的特徴と各種遺伝子発現の関連における解析

嗜铬细胞瘤临床特征与各种基因表达的关系分析

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
藤本真徳;滝口朋子;佐久間一基;中山哲俊;駒井絵里;志賀明菜;河野貴史;樋口誠一郎永野秀和;橋本直子;鈴木佐和子;小出尚史;吉田知彦;田中知明;横手幸太郎
通讯作者：
横手幸太郎

Manifestations of Systemic Lupus Erythematosus in Female Patients with Polysomy X: The possible role of chromosome X.

X 型多体性女性患者系统性红斑狼疮的表现：X 染色体的可能作用。

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
Modern Rheumatology.
影响因子：
0
作者：
Taro Iwamoto*;Masanori Fujimoto*;Kei Ikeda;Aiko Saku;Sohei Makita;Shunsuke Furuta;Timothy B Niewold;Hiroshi Nakajima.
通讯作者：
Hiroshi Nakajima.

リキシセナチドの2型糖尿病における治療効果の検討

利西拉来治疗2型糖尿病的疗效观察