新規パッケージング細胞を用いた次世代型アデノウイルスベクターの効率的な作製

アデノウイルス (Ad) のゲノムDNAより転写される約160塩基の小分子RNAであるVirus-associated RNA（VA-RNA）は、自然免疫を活性化することが報告されている。Adベクター投与時に活性化する自然免疫は肝障害等の副作用の引き金になると考えられているが、研究代表者らはAdベクターからもVA-RNA が発現することを報告しており、故にVA-RNA欠損Adベクター（AdΔVRベクター）では、自然免疫応答が減弱し安全性が向上すると期待された。しかしながら、AdΔVRベクターの作製法は確立されていない。本研究では、Adベクター作製用のパッケージング細胞であるHEK293細胞において、マイクロRNA（miRNA）の産生に関与する分子であるDicerをノックダウンするとAdΔVRベクターが増殖することを明らかとしていたが、本細胞を用いても高タイターのAdΔVRベクターは作製できなかった。そこで、AdΔVRベクターの増殖を底上げするために、VA-RNAの生理機能の解析を試みた。過去の研究で、VA-RNAが細胞内でmiRNA様の分子（mivaRNA）に変換されることが報告されていたことから、mivaRNAに着目し検討を行ったところ、数種類あるmivaRNAアイソフォームのうち、特定のアイソフォームがAdの増殖を促進することを見出した。また、マイクロアレイ解析やin silico 解析によって、Adの増殖に寄与するmivaRNA標的遺伝子としてCUL4Aを同定した。さらに、CUL4Aがタンパク質のユビキチン化を介した分解に関与する分子であることから、CUL4A依存的に分解されるタンパク質の中でAdの増殖に関与するものを探索したところ、c-JunがAdの増殖に寄与することを明らかとした。以上、本研究により次世代型Adの開発に応用可能な新しい知見を得ることに成功した。

アデノウイルス (Ad) のゲノムDNAより転写される約160塩基の小分子RNAであるVirus-associated RNA（VA-RNA）は、自然免疫を活性化することが報告されている。Adベクター投与時に活性化する自然免疫は肝障害等の副作用の引き金になると考えられているが、研究代表者らはAdベクターからもVA-RNA が発現することを報告しており、故にVA-RNA欠損Adベクター（AdΔVRベクター）では、自然免疫応答が減弱し安全性が向上すると期待された。しかしながら、AdΔVRベクターの作製法は確立されていない。本研究では、Adベクター作製用のパッケージング細胞であるHEK293細胞において、マイクロRNA（miRNA）の産生に関与する分子であるDicerをノックダウンするとAdΔVRベクターが増殖することを明らかとしていたが、本細胞を用いても高タイターのAdΔVRベクターは作製できなかった。そこで、AdΔVRベクターの増殖を底上げするために、VA-RNAの生理機能の解析を試みた。過去の研究で、VA-RNAが細胞内でmiRNA様の分子（mivaRNA）に変換されることが報告されていたことから、mivaRNAに着目し検討を行ったところ、数種類あるmivaRNAアイソフォームのうち、特定のアイソフォームがAdの増殖を促進することを見出した。また、マイクロアレイ解析やin silico 解析によって、Adの増殖に寄与するmivaRNA標的遺伝子としてCUL4Aを同定した。さらに、CUL4Aがタンパク質のユビキチン化を介した分解に関与する分子であることから、CUL4A依存的に分解されるタンパク質の中でAdの増殖に関与するものを探索したところ、c-JunがAdの増殖に寄与することを明らかとした。以上、本研究により次世代型Adの開発に応用可能な新しい知見を得ることに成功した。