Ａ型インフルエンザウイルスＰＡ－ＸのｍＲＮＡ分解機構の解明

阐明甲型流感病毒PA-X的mRNA降解机制

• 批准号: 16J07228
• 负责人: 大石 康平
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J07228/
• 关键词: インフルエンザウイルス; PA-X; N末端アセチル化; 発現抑制

A型インフルエンザウイルス蛋白質PA-XはmRNAを分解することで蛋白質の発現を抑制するshutoff活性をもつ。しかしながら、PA-Xがどのような機序でmRNAを分解しているのかは明らかになっていない。そこで、PA-Xによるshutoff機構を解明し、インフルエンザウイルスにおけるPA-Xの重要性を明らかにすることを目的とし、研究を行った。酵母を用いたスクリーニングによりPA-Xのshutoff活性に重要な遺伝子としてN末端アセチル化酵素NatBの構成蛋白質であるNat3とMdm20を同定した。NatBがヒト細胞でのPA-Xの活性に重要かどうか調べるため、Nat3、Mdm20のヒトホモログ遺伝子であるNAA20、NAA25をノックアウト（KO）したヒト細胞株を樹立し、これらの細胞株におけるPA-Xの活性を調べた。するとNAA20やNAA25をKOした細胞株におけるPA-Xの活性は野生型細胞株における活性と比べ著しく低いことがわかった。NatBはM-E、M-DまたはM-Nから始まる蛋白質のN末端をアセチル化する。PA-XはM-EというN末端配列をもち、これまでの結果からNatB認識配列をもつときPA-Xは高い活性を示し、またヒト細胞で発現させたPA-XのN末端はアセチル化されていることがわかっている。PA-XのN末端アセチル化にNatBが重要かどうか調べるため、NAA20やNAA25をKOした細胞でPA-Xを発現させ解析すると、野生型細胞で発現させたときと比べ、KO細胞で発現させたときPA-XのN末端がアセチル化されている割合が低下していた。これにより、ヒト細胞におけるPA-Xのshutoff活性およびN末端アセチル化にNatBが重要であることがわかった。これまでに得られた結果から、PA-Xのshutoff活性にはNatBによるN末端アセチル化が重要であることがわかった。

Type A protein PA-X mRNA decomposition, protein production inhibition, shutoff activity PA-X mRNA analysis and sequencing PA-X shutdowns are important for understanding, understanding and studying PA-X. Yeast uses a variety of enzymes, such as PA-X shutoff activity, Nat3 and Mdm20, which are important genes and N-terminal enzymes. PA-X activity in NatB cells was significantly modulated by NAA20, NAA25 in Nat3, Mdm20, and PA-X activity in these cell lines. The activity of PA-X in KO cell lines was lower than that in wild type cell lines. NatB M-E, M-D, M-N, N-terminal protein fusion PA-X is highly active in the N-terminal region of PA-X, and the N-terminal region of PA-X is highly active in PA-X. PA-X N-termini are isolated from NatB, NAA20, NAA25, KO cells and PA-X is detected in wild-type cells. This is the first time that a cell has ever had a PA-X shutdown. This is the result of PA-X shutoff activity.

项目成果

Identification of novel amino acid residues of influenza virus PA-X that are important for PA-X shutoff activity by using yeast.

• DOI: 10.1016/j.virol.2018.01.004
• 发表时间: 2018-03
• 期刊: Virology
• 影响因子: 3.7
• 作者: Oishi K;Yamayoshi S;Kawaoka Y
• 通讯作者: Kawaoka Y

Evaluation of seasonal influenza vaccinese for H1N1pdm09 and type B viruses based on a replication-incompetent PB2-KO virus.

基于无复制能力的 PB2-KO 病毒对 H1N1pdm09 和 B 型病毒的季节性流感疫苗进行评估。

• DOI: 10.1016/j.vaccine.2017.02.041
• 发表时间: 2017
• 期刊: Vaccine
• 影响因子: 5.5
• 作者: Ui H;Yamayoshi S;Uraki R;Kiso M;Oishi K;Murakami S;Mimori S;Kawaoka Y.
• 通讯作者: Kawaoka Y.

Risk assessment of recent Egyptian H5N1 influenza viruses.

最近埃及H5N1流感病毒的风险评估。

• DOI: 10.1038/srep38388
• 发表时间: 2016-12-06
• 期刊: Scientific reports
• 影响因子: 4.6
• 作者: Arafa AS;Yamada S;Imai M;Watanabe T;Yamayoshi S;Iwatsuki-Horimoto K;Kiso M;Sakai-Tagawa Y;Ito M;Imamura T;Nakajima N;Takahashi K;Zhao D;Oishi K;Yasuhara A;Macken CA;Zhong G;Hanson AP;Fan S;Ping J;Hatta M;Lopes TJ;Suzuki Y;El-Husseiny M;Selim A;Hagag N;Soliman M;Neumann G;Hasegawa H;Kawaoka Y
• 通讯作者: Kawaoka Y

Toward the identification of host proteins involved in the shutoff activity of influenza A virus PA-X

鉴定参与甲型流感病毒 PA-X 关闭活性的宿主蛋白

• 发表时间: 2016
• 作者: K. Oishi;S. Yamayoshi;Y. Kawaoka
• 通讯作者: Y. Kawaoka

A Broadly Reactive Human Anti-hemagglutinin Stem Monoclonal Antibody That Inhibits Influenza A Virus Particle Release.

• DOI: 10.1016/j.ebiom.2017.03.007
• 发表时间: 2017-03
• 期刊: EBioMedicine
• 影响因子: 11.1
• 作者: Yamayoshi S;Uraki R;Ito M;Kiso M;Nakatsu S;Yasuhara A;Oishi K;Sasaki T;Ikuta K;Kawaoka Y
• 通讯作者: Kawaoka Y