腫瘍微小環境におけるマクロファージの生体内ＦＲＥＴイメージングによる解析

通过体内 FRET 成像分析肿瘤微环境中的巨噬细胞

• 批准号: 16J09066
• 负责人: 小西 義延
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J09066/
• 关键词: FRET; ライブイメージング; ERK; 細胞運動; 胸腺細胞; FRETバイオセンサー; ROSA26 locus; 相同組換え; Tol2

ERKマップキナーゼは細胞膜の情報を感知し、細胞の増殖、分化、運動などを制御する。胸腺細胞の分化成熟に、適切な運動制御およびERK活性がそれぞれ必須であることが知られていた。しかし、これまで組織内の単一細胞についてERK活性の経時変化の評価は困難であったため、胸腺細胞の運動制御にERK活性が関与するのかどうか不明であった。この問題を克服するために、申請者はERK活性を経時的に可視化できるFRETバイオセンサーの発現ユニットをROSA26遺伝子座へ導入した新規マウスを作出した。その結果、従来は観察困難であった組織胸腺細胞のFRETイメージングが可能となった。この技術により、組織から単離した胸腺細胞を用いては観察できない、DP細胞とCD4-SPあるいはCD8-SP細胞間のERK活性の差を発見した。更に、ERK活性が胸腺細胞の運動を抑制すること、その抑制様式がサブセット間で異なることを見出した。特にCD4-SP細胞ではTCRとMHCクラスII分子を介した細胞間相互作用がERK活性に動的変化を生み、結果として細胞運動を抑制することを明らかにした。ERK活性化による運動抑制がTCRを介した抗原認識に貢献し、正常なT細胞の産生へ寄与することが示唆された。以上の研究は、胸腺細胞の運動制御に関するERK活性動態の機能解明に貢献し、胸腺細胞の運動制御分子メカニズムの理解に寄与するものと考えられる。

ERK ップキナ ップキナ ゼ ゼ ゼ cell membrane <s:1> information を perception ゼ, cell <s:1> proliferation, differentiation, motility な <s:1> を control する. The <s:1> differentiation and maturation of thymocytes に, and the appropriate な movement to control およびERK activity がそれぞれ must be である とが とが to know られて and た た た. し か し, こ れ ま で tissues の 単 a cell に つ い て ERK activity の 経 variations change when の review 価 は difficult で あ っ た た め, thymus cells の suppression に ERK activity が masato and す る の か ど う か unknown で あ っ た. こ の を overcome す る た め に, applicants は ERK activity を 経 に visualization when で き る FRET バ イ オ セ ン サ ー の 発 now ユ ニ ッ ト を ROSA26 heritage 伝 stroma へ import し た new rules マ ウ ス を make し た. Youdaoplaceholder0 そ results, 従 to 観 観 difficult to examine であった tissue thymocytes <s:1> FRET メ ジ ジ グが グが グが may となった. こ の technology に よ り, organization か ら 単 from し た thymus cells を using い て は 観 examine で き な い, DP と CD4 cells - SP あ る い は CD8 - between SP cells の ERK activity の poor を 発 see し た. More に, ERK inhibition す が thymus cells の movement を る こ と, そ の suppress others type が サ ブ セ ッ ト で between different な る こ と を shows し た. Special に CD4 cells - SP で は TCR と MHC ク ラ ス II molecules を interface し た interactions between cells が ERK activity に moving result を み, variations of と し て cell movement を inhibit す る こ と を Ming ら か に し た. ERK activation に よ る movement inhibiting が TCR を interface し た antigen know に contribution し, normal な T cells の へ send and す る こ と が in stopping さ れ た. Above の research は, thymus cell suppression の movement に masato す る ERK activity function of dynamic の interpret に contribution し, thymus cells の movement royal molecular メ カ ニ ズ ム の understand に send す る も の と exam え ら れ る.

项目成果

CD4シングルポジティブ胸腺細胞のERK活性は胸腺組織内において運動速度と負の相関を示す

CD4单阳性胸腺细胞ERK活性与胸腺组织运动速度呈负相关

• 发表时间: 2018
• 作者: 小西義延;寺井健太;阿部高也;濱崎洋子;木梨達雄;高折晃史;松田道行
• 通讯作者: 松田道行

FRET imaging of T lymphocytes using cre-inducible ROSA26 knock-in transgenic mice

使用 cre 诱导型 ROSA26 敲入转基因小鼠对 T 淋巴细胞进行 FRET 成像

• 发表时间: 2017
• 作者: Yoshinobu Konishi;Kenta Terai;Yoko Hamazaki;Takaya Abe and Michiyuki Matsuda
• 通讯作者: Takaya Abe and Michiyuki Matsuda

Live-Cell FRET Imaging Reveals a Role of ERK Activity Dynamics in Thymocyte Motility

活细胞 FRET 成像揭示 ERK 活性动态在胸腺细胞运动中的作用

• 发表时间: 2018
• 作者: Yoshinobu Konishi;Kenta Terai;Takaya Abe;Yoko Hamazaki;Akifumi Takaori-Kondo;and Michiyuki Matsuda
• 通讯作者: and Michiyuki Matsuda

胸腺細胞ERK活性のFRETイメージング解析

胸腺细胞ERK活性的FRET成像分析

• 发表时间: 2017
• 作者: Yoshinobu Konishi;Kenta Terai and Michiyuki Matsuda
• 通讯作者: Kenta Terai and Michiyuki Matsuda

Two-photon-excited fluorescence excitation spectra of red fluorophores and fluorescent proteins

红色荧光团和荧光蛋白的双光子激发荧光激发光谱

• 发表时间: 2016
• 作者: 小西義延;上岡裕治;松田道行
• 通讯作者: 松田道行